BMP-2生物学活性新型检测系统的构建及功能验证

摘要

目的 开发了基于双萤光素酶报告基因稳转细胞株(C2C12^BBDE)的BMP-2生物学活性新型检测系统,以解决传统碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性检测法灵敏度低、耗时长和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法操作流程繁琐的问题。方法C2C12^BBD_F细胞株通过慢病毒感染,在C2C12细胞中稳定整合了BMP-2响应启动子驱动的纳米萤光素酶（NLuc）,并以萤火虫萤光素酶（Fluc）作为内参来确保基础转录水平的稳定性,通过反向转录单元设计和PolyA插入有效消除启动子干扰。结果 实验结果表明,新型检测系统具有显著优势:检测灵敏度达0～30 ng/mL,与qRT-PCR相当且显著优于ALP法;检测周期仅需16 h,较ALP法效率提升7倍以上;操作流程简便,避免了qRT-PCR中RNA提取、反转录等复杂步骤。结论 该系统的成功开发不仅为BMP-2活性检测提供了标准化工具,其模块化设计更为其他生长因子的活性检测研究提供了可借鉴的技术方案,对促进骨再生药物的研发和临床应用具有重要价值。

关键词

骨形态发生蛋白-2 / 双萤光素酶报告系统 / 纳米萤光素酶 / 生物活性检测