EPHB4对骨肉瘤细胞恶性进展的调控作用及机制研究

摘要

目的 探讨肝配蛋白B4(erythropoietin-producing hepatocyte receptor B4,EPHB4)对骨肉瘤恶性进展的调控与作用机制。方法 蛋白质印迹法检测U2OS、SaOS2-LM7、SaOS2、143B中EPHB4的表达变化。将SaOS2-LM7分为对照组、si-NC组、si-EPHB4组、sEPHB4(可溶性EPHB4封闭抗体)组，利用CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖，利用流式细胞术检测细胞凋亡，利用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭迁移能力。用红色荧光蛋白(red fluorescent protein, RFP)标记的SaOS2-LM7构建稳定沉默EPHB4的细胞(EPHB4-si-RNA-RFP)。在体内实验中，将24只荷瘤裸鼠分为2组，即control-RFP组和EPHB4-siRNA-RFP组。通过小动物活体成像仪检测1～4周后癌细胞的肺转移情况。免疫组织化学法分析4周后肿瘤组织中EPHB4、分化簇33(cluster of differentiation 33,CD33)、细胞周期蛋白D1(CYCLIN D1)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、MMP-14、β-CATENIN的表达。结果 与U2OS比较，EPHB4在SaOS2-LM7、SaOS2、143B中的表达增加(P_均<0.05)。SaOS2-LM7细胞实验中，与对照组比较，sEPHB4组和si-EPHB4组的EPHB4表达、细胞的增殖活力和EdU阳性率显著降低，凋亡率显著增加，迁移率和侵袭率显著降低(P_均<0.05)。此外，与对照组比较，sEPHB4组和si-EPHB4组的β-CATENIN、CYCLIN D1、MMP-9、MMP-14的相对表达水平也显著降低(P_均<0.05)。在体内实验中，EPHB4-siRNA-RFP组在3周和4周的肺部转移率显著低于control-RFP组(P_均<0.05)。EPHB4-siRNA-RFP组的肿瘤组织中EPHB4、CD33、CYCLIN D1、MMP-9、MMP-14、β-CATENIN的表达均下调(P_均<0.05)。结论 沉默EPHB4能显著抑制骨肉瘤细胞中WNT/β-CATENIN信号通路的激活，抑制细胞的增殖、迁移和侵袭，促进细胞凋亡。

关键词

肝配蛋白B4 / 骨肉瘤 / 迁移 / 侵袭 / 凋亡 / WNT/β-CATENIN信号通路