Diaph1基因在阿霉素诱导的肾脏损伤中的保护作用

摘要

目的 探讨透明形成素相关蛋白1（diaphanous-related formin 1,Diaph1）在肾病模型小鼠肾脏中的关键作用。方法 野生型（WT）、杂合型(Diaph1^+/-)及纯合型(Diaph1^-/-)小鼠分别构建对照组、阿霉素模型组，每组7只。阿霉素模型组使用尾静脉注射阿霉素诱导，对照组给予等体积生理盐水注射。利用CRISPR/Cas9技术对小鼠Diaph1基因全身敲除，再通过杂合小鼠交配繁育出纯合小鼠，PCR进行基因型鉴定；HE染色观察各组小鼠肾脏形态，免疫荧光染色观察Diaph1在肾小球及周围肾小管的表达；微量酶标仪法和肌氨酸氧化酶法分别检测小鼠血清及尿液中白蛋白与肌酐；蛋白质印迹检测小鼠肾皮质Diaph1蛋白表达；实时荧光定量PCR检测小鼠足蛋白（Podocin）、CD2相关蛋白（CD2-associated protein, Cd2ap）、肾病蛋白（Nephrin）及肾足突裂孔膜蛋白1（kin of IRRE-like protein 1,Neph1）的mRNA表达。结果 在野生型小鼠中，与对照组相比，阿霉素模型组小鼠体质量下降（P<0.05）、肾小囊囊腔变窄，生化指标检测发现尿白蛋白相对含量升高（P<0.05）、血肌酐含量升高（P<0.05）,而尿肌酐含量下降（P<0.05）;基因表达水平检测发现Diaph1基因mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）。在Diaph1敲除小鼠中，与阿霉素处理后的WT小鼠相比，阿霉素处理后的杂合(Diaph1^+/-)及纯合(Diaph1^-/-)小鼠肾小球硬化程度均加重、肾小球囊腔均变窄；基因表达水平检测发现，阿霉素处理后的纯合(Diaph1^-/-)小鼠肾脏中Podocin、Cd2ap和Nephrin的表达均有所降低（P<0.05）,同时生化指标检测发现血清白蛋白和血肌酐含量降低（P<0.05）。结论 Diaph1基因在肾脏足细胞及肾小管上皮细胞中发挥重要的保护作用，表明Diaph1是阿霉素肾病模型中潜在功能基因，为肾病综合征的治疗以及未来研究提供了新的思路和方向。

关键词

肾病综合征 / 透明形成素相关蛋白1 / 阿霉素 / Diaph1基因敲除小鼠

基金资助

内蒙古自治区自然科学基金(No.2025QN03114); 包头医学院博士科研启动基金(No.BYJJ-BSJJ202408、No.BYJJ-GCC202510);包头医学院花蕾计划(No.HLJH202516);包头医学院科学研究发展基金项目(No.BYJJQCJH202601); 包头市青年创新人才项目(No.00123320)