慢病毒载体介导miR-195低表达调控BMMSCs成骨分化及血管生成

摘要

目的 探讨慢病毒载体介导微小RNA-195(miR-195)低表达对骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）成骨分化与成血管分化的调控作用及可能机制。方法 将人BMMSCs分为空白对照组、inhibitor-NC组（慢病毒转染阴性对照NC序列）、miR-195-inhibitor组（慢病毒转染miR-195抑制序列）。采用RNA荧光原位杂交检测miR-195表达定位，CCK-8法检测增殖活力；碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）染色、茜素红染色及Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)免疫荧光评估成骨分化；血管生成拟态实验结合qRT-PCR检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、ALP、Runx2、VEGF受体2(VEGF receptor 2,VEGFR2)、促血管生成素（angiopoietin-1,Ang-1）及Wnt/β-catenin通路相关分子Wnt3a、Wnt10b、β-连环蛋白（β-catenin）、成骨细胞特异性转录因子（Osterix）的mRNA水平，蛋白质印迹检测上述通路及成骨相关蛋白表达。结果 与对照组相比，miR-195-inhibitor组miR-195表达显著下调（P_均<0.05），增殖活力、ALP活性（4.15±0.52 vs1.00±0.15）、茜素红阳性率（64.67%±7.78%vs 31.86%±2.24%）、Runx2荧光强度（852.38±122.70 vs121.31±12.16 RFU）、管状结构长度（218.60±24.75 vs 49.80±5.25µm/视野），VEGF、 ALP、 Runx2、VEGFR2、Ang-1、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin、Osterix mRNA水平及Wnt3a、Wnt10b、β-catenin、Osterix蛋白水平均显著上调（P_均<0.05），而与空白对照组比较，inhibitor-NC组的上述指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 慢病毒载体介导的miR-195低表达通过激活Wnt/β-catenin信号通路，协同促进BMMSCs成骨与成血管分化。

关键词

慢病毒载体 / 微小RNA-195 / 骨髓间充质干细胞 / 成骨分化 / 成血管分化

基金资助

“青年科研起航”基金青年项目(No.2024YFY-QKQN-86)