LncRNA Vof16通过HNRNPU/CPLX1影响脊髓损伤后轴突生长

摘要

目的 明确长链非编码RNA Vof16 (lncRNA Vof16)是否通过异质性胞核核糖核蛋白U (heterogeneous nuclear ribonucleoprotein U,HNRNPU)/复合蛋白1 (complexin 1,CPLX1)轴促进脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后轴突再生。方法 动物水平实验中,将SD大鼠按随机数字表法分为Sham、SCI、SCI+sh-NC、SCI+Vof16-KD、SCI+oe-NC、SCI+Vof16-OE组。BBB评分及机械退缩阈值评估运动-感觉功能。RNA-seq联合qRT-PCR筛选并验证差异lncRNA。脊髓组织行qRT-PCR检测Vof16、HNRNPU、CPLX1表达。细胞实验中,分离原代脊髓神经元细胞进行氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD),构建Vof16过表达(Vof16-OE)、HNRNPU过表达(HNRNPU-OE)或敲低(HNRNPU-KD),及Vof16-OE+HNRNPU-OE和Vof16-OE+HNRNPU-KD组。CCK-8、Transwell、免疫荧光分别检测细胞增殖、迁移及微管稳定性。验证Vof16-HNRNPU-CPLX1相互作用。结果 RNA-seq结果显示lncRNA Vof16在大鼠脊髓损伤后脊髓组织中高表达。过表达Vof16可提高OGD神经元增殖、迁移,增加ace-tubulin、降低tyr-tubulin (P<0.05)。机制上,Vof16直接结合HNRNPU,抑制其降解;HNRNPU进一步结合CPLX1 mRNA并增强其稳定性。HNRNPU敲低可逆转Vof16的促再生效应。体内实验显示,SCI+Vof16-OE组术后21d BBB评分较SCI+oe-NC组提高(P<0.05),机械退缩阈值降低,脊髓组织HNRNPU、CPLX1表达同步升高。结论 lncRNA Vof16能够招募HNRNPU,稳定CPLX1 mRNA,从而促进轴突再生。

关键词

lncRNA Vof16 / 异质性胞核核糖核蛋白U / 复合蛋白1 / 脊髓损伤 / 轴突生长

基金资助

湖南省自然科学基金(No.2023JJ50407)