肾细胞共培养体系中miR-29b对OPN/TGF-β通路的调控作用及高糖环境下该通路的变化

摘要

目的 建立模拟肾脏屏障系统的肾细胞共培养体系，探讨miR-29b-3p对骨桥蛋白（osteopontin,OPN）/转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)通路的调控作用及高糖环境下该通路的变化。方法 建立肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞和肾足细胞共培养体系，测试不同葡萄糖浓度（5、8、12、16 mmol/L）下的细胞活性和糖消耗值，并测定细胞上清中TGF-β和OPN的含量。转染表达OPN的重组质粒或OPN siRNA，采用Q-PCR和Western blot方法检测TGF-β和OPN的表达。结果 在细胞共培养体系中，高糖（12 mmol/L）时OPN、TGF-β和miR-29b的mRNA表达均明显增加。Western blot结果显示，高糖时OPN蛋白增加，而TGF-β蛋白变化并不明显；加入miR-29b-3p激活剂后，细胞上清中OPN和TGF-β的mRNA水平明显增加；加入miR-29b-3p抑制剂后，细胞上清中OPN和TGF-β的mRNA水平明显下降。在基础糖浓度（5 mmol/L）下，miR-29b-3p激活剂使OPN和TGF-β的蛋白表达增加；miR-29b-3p抑制剂使OPN和TGF-β的蛋白表达减少。转染OPN重组质粒后，细胞上清中TGF-β蛋白表达增加，细胞中的OPN和TGF-β的mRNA表达明显增加；转染OPN siRNA至细胞后，细胞上清中TGF-β蛋白减少，细胞中的OPN mRNA表达明显减少，而TGF-β mRNA表达未见明显上升。结论 肾细胞共培养体系可模拟体内肾脏环境，高糖诱导可抑制细胞增殖，使糖消耗增加，细胞上清中TGF-β含量增加，在该环境下miR-29b-3p对OPN/TGF-β信号通路具有调控作用。

关键词

糖尿病肾病(DN) / 肾细胞 / miR-29b-3p / 骨桥蛋白(OPN) / 转化生长因子β(TGF-β) / 高糖 / 共培养

基金资助

上海市自然科学基金（21ZR1413900）; 复旦大学附属中山医院青浦分院院级基金（QYM2020-05）