液相色谱-串联质谱检测血浆γ-氨基丁酸方法的建立和临床应用

摘要

目的 建立一种稳定的血浆γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid,GABA）的液相色谱-串联质谱（liquid chromotography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）检测方法，并评估基于该法的GABA检测结果用于辅助诊断睡眠障碍的价值。方法 使用UPLC XevoTQs液质联用仪检测GABA，并进行预验证和性能验证，建立健康人群的参考范围。比较表观健康人群和睡眠障碍患者血浆中GABA含量是否存在差异。结果 以氘代化合物作为同位素内标，采用Amide色谱柱进行分离。流动相为0.050%甲酸水溶液和含0.175%甲酸和5 mmol/L乙酸铵的90%乙腈水溶液，梯度洗脱，柱温35℃。LC-MS/MS检测GABA的线性范围为0.05～10.00μmol/L，定量下限为0.02μmol/L，批内变异系数（coefficient of variation,CV）<3.00%，批间CV<4.00%，回收率为101.06%～109.02%。将300例健康人按年龄把GABA参考范围分为3组：18～34岁为0.08～0.15μmol/L,35～49岁为0.10～0.20μmol/L，≥50岁为0.12～0.23μmol/L。以血浆GABA为标志物辅助诊断睡眠障碍，检测221例患者和300例健康人，结果显示18～34岁、35～49岁和≥50岁组的AUC分别为0.510(P=0.850)、0.686(P=0.002)和0.890(P<0.001),GABA的最佳截断值（cut-off）分别为0.09、0.10和0.11μmol/L。结论 所建立的LC-MS/MS方法检测GABA的结果可靠，能够灵敏、准确地检测血浆GABA水平，可用于辅助诊断睡眠障碍。

关键词

γ-氨基丁酸(GABA) / 液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS) / 睡眠障碍 / 性能验证 / 参考范围