CAMK4介导胆红素所致听觉中枢神经元氧化应激损伤

摘要

目的 探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶4(calcium/calmodulin-dependent protein kinase IV, CAMK4)在胆红素介导的听觉中枢神经毒性中的作用。方法 通过分子对接和微量热泳动技术(microscale thermophoresis, MST)评估CAMK4与胆红素的结合能力。采用石蜡切片免疫荧光染色法检测CAMK4在耳蜗核中的表达。在体外培养的耳蜗核原代神经元中，分别给予胆红素(25μmol/L)或胆红素联合CAMK4抑制剂KN-93(1μmol/L)处理，随后评估神经元的ROS水平、线粒体膜电位变化，进行Annexin V/PI染色及活/死细胞染色。结果 分子对接分析显示，胆红素与CAMK4的结合能为-9.71 kcal/mol, MST检测得到平衡解离常数值为(1.294 4±1.080 3)μmol/L,提示二者具有较强的结合潜力。在耳蜗核中，CAMK4主要表达于神经元。体外实验结果表明，CAMK4抑制剂KN-93能够显著抑制高浓度胆红素诱导的耳蜗核神经元ROS蓄积、线粒体膜电位下降，以及细胞晚期凋亡和存活率下降。结论 CAMK4在胆红素介导的听觉中枢氧化应激损伤中发挥重要作用。

关键词

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶4 / 胆红素 / 神经毒性 / 氧化应激