AAV-ie-Tnfaip8l2的包装及其对Tnfaip8l2^-/-小鼠听觉功能的改善效果

摘要

目的 腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）是基因治疗的重要载体。本研究旨在包装AAV-ie-Tnfaip8l2病毒，系统评估能否以AAV为载体实现Tnfaip8l2蛋白在耳蜗的原位过表达，并探索其在基因敲除小鼠模型内耳组织中的转导效率及对该基因敲除小鼠的听觉功能治疗效果。方法 采用分子克隆技术构建重组表达载体AAV-ie-Tnfaip8l2。将AAV-ie衣壳质粒及辅助质粒共转染至293T细胞中，进行病毒颗粒的组装和复制。通过超速离心和层析纯化获得高纯度、高滴度的重组腺相关病毒制剂。运用显微注射技术，经圆窗膜对Tnfaip8l2^-/-新生鼠进行圆窗注射AAV-ie-Tnfaip8l2。待Tnfaip8l2^-/-小鼠生长至35 d龄（典型听力损失显现期）时，通过听力检测、扫描电镜、免疫荧光等方法评估疗效。结果 高滴度的AAV-ie-Tnfaip8l2病毒可成功包装用于耳蜗圆窗注射，以实现Tnfaip8l2基因在Tnfaip8l2^-/-小鼠耳蜗原位高效过表达。听力学检测显示，与对照组相比，AAV-ie-Tnfaip8l2回补组小鼠Click、短纯音（4 k、8 k、12 k、16 k、24 k、32 k）以及DPOAE阈值降低（P<0.05,n=3）;扫描电镜显示外毛细胞静纤毛束排列紊乱现象得到了明显的改善。结论 本研究证实AAV-ie-Tnfaip8l2可通过圆窗注射实现Tnfaip8l2基因在小鼠耳蜗原位的高效表达，部分挽救Tnfaip8l2^-/-小鼠的听力功能，为老年性耳聋的治疗方案提供新的实验依据。

关键词

腺相关病毒 / 听力损失 / TNFAIP8L2 / 基因功能补偿