兰州百合原生质体的分离纯化和应用

摘要

该研究旨在建立兰州百合（Lilium davidii var.unicolor）原生质体分离纯化体系，以促进其基因功能研究和体细胞杂交育种。通过研究材料选择、渗透压调节剂浓度、酶添加量、酶解时间和纯化条件等关键因素，确定了酶解法提取兰州百合原生质体的最优参数。结果表明：继代30 d左右的兰州百合无菌苗叶片，在0.4 mol·L^-1的甘露醇环境下，使用含15 g·L^-1的纤维素酶和5 g·L^-1的离析酶的酶解液酶解3 h，即能分离完整均一的兰州百合叶肉原生质体，平均产量超过4×10～6个·g^-1，且细胞活力超过90%。在0.4 g·mL^-1 PEG-4000介导下转染35S::GFP质粒15 min，成功获得阳性转化子。同时，在0.5 g·mL^-1 PEG-4000与5 mmol·L^-1 CaCl₂（pH=10）作用下，原生质体发生融合，形成双核细胞。该体系的建立为兰州百合体细胞杂交育种提供了高质量的细胞材料，也为其基因功能研究搭建了平台。

关键词

兰州百合 / 原生质体 / 瞬时转化 / 化学融合