降低常夏石竹玻璃化率及促进生根的方法

Methods for Reducing the Vitrification Rate and Promoting Rooting Formation of Dianthus plumarius

摘要

以常夏石竹（Dianthus plumarius）带芽茎段为外植体，筛选最佳HgCl₂消毒时间和增殖培养基，研究外 加活性炭（AC）、矮壮素（CCC）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、多效唑（PP₃₃₃）对常夏石竹无菌苗玻璃化及不同植物生长激素配比对生根的影响。结果表明：适宜常夏石竹带芽茎段消毒的方法是75% 乙醇消毒30 s+0.1% HgCl₂消毒10 min，成活率达86.63%；MS+2 mg⋅L^-1 6-BA+0.05 mg⋅L^-1 NAA+30 g⋅L^-1蔗糖+7 g⋅L^-1琼脂为适宜的增殖培养基，丛生芽增殖率为90.28%，平均高度为5.25 cm，增殖系数较高（12.31）；在降低常夏石竹无菌苗玻璃化效果方面，添加物效力由高到低依次为CCC、AC、PP₃₃₃、PVP，在1/2MS培养基内添加3 mg⋅L^-1的CCC有利于无菌苗克服玻璃化，且植株生长健壮；在克服玻璃化率最优的培养基配方中添加0.5 mg⋅L^-1 NAA适宜常夏石竹无菌苗生根，生根率达100%，平均根长为16.83 cm，单株平均生根数为15.66 条。研究结果将为常夏石竹组培快繁及工厂化育苗提供理论和技术支持。

Abstract

The shoot tips of Dianthus plumarius were used as explants， and the optimal disinfection duration with HgCl₂ and the suitable proliferation medium were screened out. The effects of adding activated carbon（AC）， chlormequat（CCC）， polyvinylpyrrolidone（PVP）， and paclobutrazol（PP₃₃₃） on the vitrification aseptic seedlingsof D. plumarius， as well as the impact of different plant hormone ratios on rooting were investigated. The results indicated that the appropriate disinfection method for shoot tips of D. plumarius was 75% ethanol for 30 s followed by 0.1% HgCl₂ for 10 min， and the survival rate was 86.63%. The suitable proliferation medium was identified as MS supplemented with 2 mg⋅L^-1 6-benzylaminopurine（6-BA）， 0.05 mg⋅L^-1 Naphthaleneacetic acid （NAA）， 30 g⋅L^-1 sucrose， and 7 g⋅L^-1 agar， resulting in cluster buds proliferation rate of 90.28%， with an average bud height of 5.25 cm and a high proliferation coefficient of 12.31. In reducing the vitrification effect aseptic seedlingsof D. plumarius， the effect from high to low was CCC， AC， PP₃₃₃ and PVP. Adding 3 mg⋅L^-1 CCC in 1/2 MS medium was beneficial for overcoming the vitrification phenomenon and promoting plant growth. Adding 0.5 mg⋅L⁻¹ NAA to the medium formula that is optimal for overcoming the vitrification rate is appropriate for the rooting of sterile seedlings of D. plumarius semperflorens. The rooting rate can reach 100%， with an average root length of 16.83 cm and an average number of 15.66 roots per individual plant. The findings provided theoretical and technical supports for the rapid propagation and industrial seedling production of D. plumarius.

Graphical abstract

关键词

常夏石竹 / 消毒 / 增殖 / 玻璃化 / 生根

Key words

Dianthus plumarius / sterilization / proliferation / vitrification / rooting

常夏石竹（Dianthus plumarius）为石竹科（Caryophyllaceae）石竹属（Dianthus）多年生草本观赏花卉，园林配置中常作一、二年生栽培，花期长，花色丰富^［1］。因其花色丰富艳丽，品种繁多，常以成簇或成片的栽植方式被广泛应用于各种园林景观中，能有效美化环境，提升景观观赏性，也常被用作切花材料^［2］。近年来，随着人们对环境质量要求的提高，对常夏石竹的需求也不断增加，但传统园艺栽培中，常夏石竹繁殖通常采用扦插、分株等方法，存在品种退化和繁殖系数低的问题，难以满足市场需求，因此需要寻找更有效的繁殖方法，适应不断增长的市场需求。植物组织培养技术能够很好地解决这一问题^［3］。在常夏石竹离体培养中，外植体极易出现玻璃化，成为其组织培养技术中的主要障碍^［4］。玻璃化的无菌苗表现出植株半透明，茎细弱，叶片卷曲等特征，生长能力下降，甚至会导致植株死亡^［5］。

本研究以常夏石竹带芽茎段为外植体，筛选最佳HgCl₂消毒时间及增殖培养基，并研究不同浓度活性炭（AC）、矮壮素（CCC）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、多效唑（PP₃₃₃）及不同植物生长激素配比对常夏石竹玻璃化、生根的影响，为常夏石竹种质资源扩繁及工厂化育苗提供理论和技术支持。

1 材料与方法

1.1　试验材料

试验材料取自山西农业大学林业站，选择生长健壮的常夏石竹单株，取带芽茎段为外植体。

1.2　方法

1.2.1　外植体消毒

将采回的外植体修剪为2 cm左右的带芽茎段，剪去叶片，用含有洗洁精的水溶液浸泡 15 min，自来水冲洗30 min后置于超净工作台进行表面消毒。先用75%乙醇浸泡30 s，无菌水清洗 2次，再用0.1% HgCl₂分别浸泡消毒7、8、9、10、 11 min，无菌水分别冲洗5次。将茎段两端及叶尖端接触HgCl₂溶液的部分切掉，切至0.5 cm左右，接种至1/2MS培养基中，培养基中均附加30 g·L^-1蔗糖、7 g·L^-1琼脂，pH调至5.8~6.0。每瓶接种 4株，接种5瓶，重复3次，10 d后统计污染率、褐化率和成活率。

1.2.2　常夏石竹增殖培养基筛选

将生长至4~5 cm的无菌苗切分为1 cm左右的单芽，接种至MS+2.0 mg·L^-1 6-BA培养基中，NAA质量浓度设置为0.05、0.10、0.50 mg·L^-1，培养基中均附加30 g·L^-1蔗糖、7 g·L^-1琼脂，pH调至5.8~6.0。每瓶接种4株，接种5瓶，重复3次。培养30 d后统计各处理下常夏石竹的增殖率、增殖系数、株高和芽生长情况。

1.2.3　常夏石竹无菌苗玻璃化抑制剂筛选

在 1/2MS培养基中分别添加活性炭（0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 g·L^-1）、矮壮素、聚乙烯吡咯烷酮、多效唑（0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mg·L^-1），分析各因素对常夏石竹无菌苗玻璃化的影响。每瓶接种 4株，接种5瓶，重复3次。培养30 d后统计各处理下玻璃化率、株高、叶片数量和芽生长情况。

1.2.4　生根培养基筛选

将生长至4~5 cm的无菌苗切分为1 cm左右的单芽，接种至生根培养基中。在筛选出克服玻璃化率最优的培养基配方中分别添加质量浓度为0、0.1、0.5、1.0 mg·L^-1的IBA、NAA，附加30 g·L^-1蔗糖、7 g·L^-1琼脂，pH调至5.8~6.0。每瓶接种4株，接种5瓶，重复3次，培养30 d后统计生根率、根长、根数量、株高并记录生长状况。

1.2.5　炼苗与移栽

选取生长健壮的无菌苗，开盖后倒入清水。室温条件下放置2 d后，转到室外培养3 d，取出后用蒸馏水清洗培养基。将其移栽到已消毒的蛭石和营养土按1∶1体积比混合的花盆中。

培养条件：培养室内温度为（25±1）℃，光照强度为3 000 lx，光周期16 h/8 h。

1.3　数据统计与分析

各指标计算公式为：

污染率=（污染株数/接种总株数）×100%（1）

褐化率=（褐化株数/接种总株数）×100%（2）

成活率=（接种总株数-褐化株数-污染株数）/接种总株数×100%（3）

增殖率=（有增殖芽数/接种芽数）×100%（4）

增殖系数=增殖30 d芽苗数/接种时芽苗数（5）

玻璃化率=（玻璃化芽数/分化总芽数）×100%（6）

生根率=（生根株数/接种总株数）×100%（7）

2 结果与分析

2.1　外植体消毒处理效果

由表1可知，0.1% HgCl₂不同消毒时间对常夏石竹的污染率、死亡率和成活率均有影响。污染率为0~53.73%，随消毒时间的延长，污染率逐渐下降，消毒10、11 min茎段无污染。成活率为43.58%~86.63%，随消毒时间的增加呈先升后降的趋势，消毒10 min成活率最高，为86.63%。褐化率为2.69%~23.37%，随消毒时间的增加而增加，消毒7 min褐化率最低且成活率最低。综合考虑，适宜常夏石竹带芽茎段的消毒方法是75%乙醇 30 s+0.1% HgCl₂ 10 min。

2.2　不同激素处理对丛生芽增殖的影响

由表2可知，丛生芽增殖率、增殖系数随NAA质量浓度升高逐渐下降。丛生芽增殖率为60.05%~90.28%，增殖系数为5.99~12.31，无菌苗玻璃化程度加重，株高随NAA质量浓度升高而增加。当NAA质量浓度为0.05 mg·L^-1时，增殖率及增殖系数最高，叶色呈鲜绿色，植株健壮，生长良好（图1A）；当NAA质量浓度为0.50 mg·L^-1时，株高最高，为9.83 cm，但植株细弱，生长缓慢，黄叶苗、死亡苗较多（图1C）。综合以上因素可知，MS+2 mg·L^-1 6-BA+0.05 mg·L^-1 NAA培养基适宜常夏石竹无菌苗丛生芽增殖。

2.3　不同活性炭质量浓度对无菌苗玻璃化的影响

由表3可知，与对照相比，不同质量浓度的活性炭均能降低常夏石竹玻璃化率。随活性炭浓度升高，无菌苗玻璃化率呈先降后升的趋势，当活性炭质量浓度为1.0 g·L^-1时，玻璃化率最低，为25.36%；当活性炭质量浓度升高至3.0~4.0 g·L^-1时，玻璃化率升高，且差异显著（P<0.05）（图2E、F）。株高和叶片数量随活性炭质量浓度升高呈先升后降的趋势，当活性炭质量浓度为1.0 g·L^-1时，株高最高，为11.43 cm；叶片数量最多，为14.53片，显著高于其他处理（P<0.05）。综合考虑，防止常夏石竹玻璃化适宜的活性炭质量浓度是1.0 g·L^-1，超过此浓度，玻璃化会加重。

2.4　不同矮壮素浓度对无菌苗玻璃化的影响

由表4可知，与对照相比，不同矮壮素质量浓度均显著降低了常夏石竹玻璃化率（P<0.05）。随矮壮素质量浓度升高，常夏石竹无菌苗玻璃化率呈先降后升趋势，当矮壮素质量浓度为3.0 mg·L^-1时，玻璃化率极低（图3E），为1.97%，说明此质量浓度矮壮素能有效抑制常夏石竹的玻璃化。株高和叶片数量随矮壮素质量浓度升高呈上升趋势，当质量浓度超过3.0 mg·L^-1时，株高和叶片数量呈下降趋势（图3F），但差异不显著（P>0.05）。不同质量浓度矮壮素处理下常夏石竹叶片均呈嫩绿色，植株生长健壮，综合考虑，适宜常夏石竹克服玻璃化的矮壮素质量浓度是3.0 mg·L^-1。

2.5　不同聚乙烯吡咯烷酮质量浓度对无菌苗玻璃化的影响

由表5可知，随聚乙烯吡咯烷酮质量浓度升高，常夏石竹无菌苗玻璃化呈先降后升的趋势，株高和叶片数量呈先升高后降低的趋势，当质量浓度为2.0 mg·L^-1时，玻璃化率较低，为54.97%，与其他处理相比差异显著（P<0.05），株高为8.94 cm，叶片数量为10.35片；当聚乙烯吡咯烷酮质量浓度为4.0 mg·L^-1时，株高和叶片数量均低于对照，说明此质量浓度的聚乙烯吡咯烷酮对常夏石竹的生长产生了抑制作用。从图4中可以看出，经聚乙烯吡咯烷酮处理后的无菌苗植株生长细弱，黄叶苗较多。适宜常夏石竹防止玻璃化的聚乙烯吡咯烷酮质量浓度为2.0 mg·L^-1。

2.6　不同多效唑质量浓度对无菌苗玻璃化的影响

由表6可知，随多效唑质量浓度升高，常夏石竹无菌苗玻璃化率呈先升后降趋势，当多效唑质量浓度为3.0 mg·L^-1时，玻璃化较低，为26.64%（图5E）；当质量浓度为4 mg·L^-1时，玻璃化率升高，为58.43%（图5F）。株高和叶片数量随多效唑质量浓度升高呈先升后降的趋势。随多效唑质量浓度升高，常夏石竹植株生长逐渐健壮，黄叶变少，但质量浓度超过3.0 mg·L^-1时，卷曲叶较多，植株生长变细弱。综合考虑认为，适宜常夏石竹防止玻璃化的多效唑质量浓度是3.0 mg·L^-1。

2.7　不同激素质量浓度对无菌苗生根的影响

由表7可知，单一添加NAA时，常夏石竹无菌苗生根率随NAA质量浓度升高而增加，当NAA质量浓度在0.5或1.0 mg·L^-1时，生根率达100%。单一添加IBA时，无菌苗生根率随IBA质量浓度升高呈先升后降趋势。同一质量浓度下，NAA对常夏石竹根系的影响效果高于IBA。培养基内同时添加NAA、IBA时，生根率随二者质量浓度升高而下降。根长和根数随NAA、IBA质量浓度升高而下降，当NAA质量浓度在0.5 mg·L^-1时，根长为16.83 cm（图6）。株高随NAA质量浓度升高而增加，当NAA质量浓度在1.0 mg·L^-1时，株高最高，为16.92 cm，但此质量浓度下植株生长细弱。综合考虑，在1/2MS+3.0 mg·L^-1 CCC中添加0.5 mg·L^-1 NAA适宜常夏石竹无菌苗生根，生根率达100%。

3 讨论

3.1　外植体表面消毒

外植体表面消毒效果是决定离体培养能否成功的第一步，通常采用2种消毒方式配合使用：75%乙醇+NaClO或75%乙醇+HgCl₂^［6-7］。不同外植体需要选择不同的消毒剂和消毒时间，消毒时间过长会造成外植体成活率下降，过短会造成污染率升高^［8］。石竹科植物常用75%乙醇+0.1%HgCl₂进行外植体消毒^［9-10］。适宜香石竹（Dianthus caryophyllus）的消毒方法是用0.1%HgCl₂处理1 min，植株后期生长良好，极少生菌^［11］。瞿麦（Dianthus superbus）茎段消毒方法是75%乙醇消毒30 s+0.1% HgCl₂消毒8 min，当消毒9 min时，茎段成活率降低^［12］。童雨嘉^［13］对中国石竹（Dianthus chinensis）茎段、叶片、花序的消毒处理中发现，75%乙醇和2.5% NaClO联合使用消毒效果差，污染率达100%，适宜3种外植体消毒方法是75%乙醇消毒30 s+0.1%HgCl₂消毒8 min。本研究发现，当0.1% HgCl₂消毒10、11 min时，茎段无污染，但消毒时间过长，褐化率和死亡率升高，与上述研究结论一致^［8-9］。

3.2　增殖培养

植物组织培养中常用6-BA和NAA对丛生芽进行增殖，增殖系数大且生长势强，其比例因植物的不同而不同^［13］。NAA对短瓣石竹（Brachystemma calycinum）丛生芽增殖起决定性作用，当6-BA质量浓度为1.0 mg·L^-1时，不定芽增殖率随NAA质量浓度升高而增加，适宜短瓣石竹丛生芽增殖的培养基为MS+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 NAA^［13］。不同NAA质量浓度对瞿麦（Dianthus superbus）丛生芽增殖的影响表现为增殖系数随NAA质量浓度升高而下降。本研究中发现随NAA质量浓度升高，常夏石竹无菌苗丛生芽增殖率、增殖系数下降，生长逐渐变弱，玻璃化现象加重，与瞿麦^［14］的研究结论一致。

3.3　玻璃化问题

玻璃化的频繁发生是石竹科植物体外培养的一个重要问题，解决玻璃化发生问题有助于促进石竹科植物的商品化发展^［15］。饶雪琴等^［16］发现，番木瓜（Carica papaya）玻璃化率随活性炭质量浓度升高呈先升后降的趋势，适宜的活性炭质量浓度是3.0 g·L^-1。在五星花（Pentas lanceolata）^［17］、瞿麦玻璃化苗的研究中发现，活性炭的添加均抑制了植株生长，存在植株低矮、叶片畸形的问题。本研究发现，常夏石竹玻璃化率随活性炭质量浓度升高呈先降后升趋势，适宜的活性炭质量浓度为3.0 g·L^-1。4.0 g·L^-1活性炭处理下玻璃化率升高，存在叶片卷曲、畸形的现象，与饶雪琴等^［16］的研究结论一致。高质量浓度的活性炭使玻璃化率升高的原因是其在吸附过程中将培养基中的铁盐、维生素等与玻璃化密切相关的物质一并吸收。这与五星花^［17］、瞿麦^［14］的研究结论不同，可能是与种、前期处理不同有关。

植物生长发育过程中，矮壮素能影响细胞壁合成，增强细胞壁强度和稳定性，减少细胞内容物的流失或透明化，进而降低玻璃化^［2］。闫娜等^［4］研究发现，5 mg·L^-1 CCC有利于防止石竹无菌苗玻璃化，株高和节间缩短，茎粗达到最大。长筒花（Achimenes erecta）无菌苗克服玻璃化的CCC质量浓度是1~2 mg·L^-1，长寿花（Kalanchoe blossfeldiana）无菌苗克服玻璃化的CCC质量浓度是3 mg·L^-1，随CCC质量浓度升高，二者玻璃化率升高^［18］。本研究发现，不同质量浓度的CCC均降低了常夏石竹无菌苗玻璃化率，适宜的CCC质量浓度是3.0 mg·L^-1，玻璃化率最低，为1.97%，且植株健壮，叶色嫩绿，与上述研究结论一致。

聚乙烯吡咯烷酮通过提高植物水合作用，改善培养基性质，增强细胞壁稳定性及调节细胞内渗透压等多个机制的共同作用，克服无菌苗的玻璃化^［12］。毛红俊等^［19］发现，3 g·L^-1 PVP能有效抑制牡丹（Paeonia suffruticosa）无菌苗玻璃化。本研究中，PVP对常夏石竹无菌苗玻璃化的抑制效果较差，经PVP处理后的常夏石竹无菌苗黄叶较多，植株细弱，与上述研究结论不同，可能是与材料、地域不同有关。此外，即使是同一品种，不同植株可能存在基因型上的差异，这些差异可能影响植物的生理和代谢过程，从而导致对PVP抑制的反应不同。

多效唑通过抑制赤霉素合成，促进养分积累、改善水分保持能力，增强细胞分化和再生能力及提高植物抗逆性综合作用克服植物组织培养中的玻璃化^［2］。培养基内添加0.2 mg·L^-1 PP₃₃₃时，黄芩（Scutellaria baicalensis）无菌苗无玻璃化现象发生^［20］。本研究中，不同质量浓度的PP₃₃₃均降低了常夏石竹的玻璃化率，适宜的PP₃₃₃质量浓度是 3.0 mg·L^-1，叶片嫩绿，植株健壮；当PP₃₃₃质量浓度为4.0 mg·L^-1时，常夏石竹无菌苗玻璃化率升高至58.43%，叶片开始变黄卷曲。多效唑作为一种植物生长调节剂，浓度过高时可能会改变植物的生理和代谢过程，如碳水化合物、脂类和激素的合成与运输，这些变化可能会使植物组织在细胞水分和结构上发生异常，从而导致玻璃化现象的加重^［21-22］。

综上所述，不同添加物处理均降低了常夏 石竹无菌苗玻璃化率，作用效果由强到弱依次为3.0 mg·L^-1 CCC、1.0 mg·L^-1 AC、3.0 mg·L^-1 PP₃₃₃、2.0 mg·L^-1 PVP；不同添加物处理对无菌苗株高的影响效果由强到弱依次为1.0 mg·L^-1 AC、3.0 mg·L^-1 CCC、2.0 mg·L^-1 PVP、3.0 mg·L^-1 PP₃₃₃，AC对无菌苗株高的影响效果较CCC优，但添加CCC的培养基植株生长较AC更为健壮。

3.4　生根诱导

生根诱导常用的生长素是NAA和IBA^［23］。卢静洁等^［24］发现，1.0 mg·L^-1 IBA有利于香石竹无菌苗根的伸长，但质量浓度过高会抑制根系生长。对重瓣瞿麦（Dianthus superbus ‘Chongban’）的研究发现，IBA对无菌苗根系的诱导效果优于NAA，当IBA质量浓度超过0.1 mg·L^-1时，其根系生长受到抑制，最适宜生根的培养配方是1/2MS+0.1 mg·L^-1 IBA，生根率达100%。兰伟等^［25］研究发现，低质量浓度的NAA有利于常夏石竹无菌苗生根培养，适宜的NAA质量浓度是0.1 mg·L^-1，生根率为95.8%，但玻璃化现象较重。单一添加NAA、IBA不利于矮生香石竹（Dianthus caryophyllus）无菌苗根系诱导，NAA和IBA共同添加时，生根率较高，适宜生根的培养基是1/2MS+0.5 mg·L^-1 NAA+ 0.5 mg·L^-1 IBA^［26］。本研究中，NAA对常夏石竹无菌苗根系的诱导效果优于IBA，适宜的NAA质量浓度是0.5 mg·L^-1，生根率为100%，且植株无玻璃化现象，植株生长健壮，与香石竹^［24］、重瓣瞿麦、矮生香石竹^［26］的研究结论不同，可能是不同植物对NAA、IBA的响应不同。

4 结论

综上所述，本研究建立了消毒灭菌、增殖培养、克服玻璃化及生根一系列完整的常夏石竹组织培养体系，通过不同质量浓度的AC、CCC、PVP和PP₃₃₃处理，筛选出能改善常夏石竹无菌苗玻璃化的最佳培养条件。研究发现，适宜常夏石竹茎段最佳的消毒方式是75% 乙醇消毒30 s+0.1% HgCl₂消毒10 min，成活率达86.63%；最佳增殖培养基配方是MS+2.0 mg·L^-1 6-BA+0.05 mg·L^-1 NAA+30 g·L^-1蔗糖+7 g·L^-1琼脂，丛生芽增殖率为90.28%；克服玻璃化率的最佳培养基配方是 1/2MS+3.0 mg·L^-1 CCC，玻璃化率为1.97%；在克服玻璃化率最佳的培养基配方中添加0.5 mg·L^-1 NAA，适宜常夏石竹生根，生根率达100%，综合考虑，常夏石竹克服玻璃化率及生根的培养基配方是1/2MS+0.5 mg·L^-1 NAA+3.0 mg·L^-1 CCC。本研究为短期内繁育优良的常夏石竹资源提供了理论和技术支撑。

参考文献

[1] 韦莹，黄浩，黄宝优，等.植物生长抑制剂对短瓣石竹离体保存的影响［J］.中药材，2020，43（1）：24-27.

[2] WEI Y，HUANG H，HUANG B Y，et al，Effect of plant growth inhibitors on in vitro preservation of Dianthus brevivalvum ［J］.Journal of Chinese Medicinal Materials，2020，43（1）：24-27.

[3] 房立晶.香石竹的离体培养与试管开花研究［D］.重庆：西南大学，2008.

[4] FANG L J.Study on in vitro culture and in vitro flowering of Dianthus caryophyllus L.［D］.Chongqing：Southwest University，2008.

[5] 刘莹.‘娇媚三变’玫瑰快繁体系的建立及再生体系的初步研究［D］.泰安：山东农业大学，2022.

[6] LIU Y.Establishment of rapid propagation system and preliminary study on regeneration system of Rosa rugosa ‘Jiaomei Sanbian’［D］.Tai’an：Shandong Agricultural University，2022.

[7] 闫娜，陆艳辉，王春彦.石竹组织培养及试管苗诱导开花［J］.分子植物育种，2024，19（6）：1-8.

[8] YAN N， LU Y H， WANG C Y.Tissue culture and in vitro induced flowering of Dianthus chinensis ［J］.Molecular Plant Breeding，2024，19（6）：1-8.

[9] BAYHAN N， YUCESAN B.Effects of sucrose and 6-benzylaminopurine concentrations on shoot regeneration and vitrification in Aronia melanocarpa：insights for plant tissue culture systems［EB/OL］.（2023-10-05）［2024-05-12］.

[10] 李佳慧，叶维雁，朱鹏锦，等.猫须草无菌短枝组织培养与快速繁殖体系的建立［J］.热带作物学报，2022， 43（10）：2063-2069.

[11] LI J H， YE W Y， ZHU P J，et al.Establishment of a sterile short shoot tissue culture and rapid propagation system for Clerodendranthus spicatus ［J］.Chinese Journal of Tropical Crops，2022，43（10）：2063-2069.

[12] 袁芳，李晶，任海平，等.藏药匙叶翼首草高频组织培养再生体系优化研究［J］.西北植物学报，2017，37（2）：379-386.

[13] YUAN F， LI J， REN H P，et al.Efficient in vitro plant regeneration system of Tibetan medicine Pterocephalus hookeri （C.B.Clarke） Höeck［J］.Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica，2017，37（2）：379-386.

[14] 扁红英，苏世平，李毅，等.次氯酸钠对白刺开放式组培苗生理特性的影响［J］.草业科学，2022，39（2）：213-221.

[15] BIAN H Y， SU S P， LI Y，et al.Effect of sodium hypochlorite on physiological characteristics of Nitraria tangutorum open tissue culture seedlings［J］.Pratacultural Science，2022，39（2）：213-221.

[16] KHARRAZI M， NEMATI H， TEHRANIFAR A，et al. In vitro culture of carnation （Dianthus caryophyllus L.） focusing on the problem of vitrification［J］.Journal of Biological and Environmental Sciences，2011，5（13）：1-6.

[17] 侯少霞，赵永秀，李佳雯，等.生长调节剂对香石竹离体快繁的影响［J］.分子植物育种，2018，16（3）：938-942.

[18] HOU S X， ZHAO Y X， LI J W，et al.Effects of different growth regulators on the rapid propagation in vitro of Dianthus caryophyllus ［J］.Molecular Plant Breeding，2018，16（3）：938-942.

[19] KARAMI O.Induction of embryogenic callus and plant regeneration in carnation （Dianthus caryophyllus L.）［J］. Journal of Biological Sciences，2008，8（4）：68-72.

[20] 童雨嘉.满天星快速繁殖与农杆菌转化体系的建立［D］.武汉：华中农业大学，2019.

[21] TONG Y J.Establishment of rapid propagation and agrobacterium-mediated transformation in Gypsophila paniculata ［D］.Wuhan：Huazhong Agricultural University，2019.

[22] 韦莹，黄浩，董青松，等.短瓣石竹茎段诱导及植株再生研究［J］.中药材，2015，38（9）：1810-1812.

[23] WEI Y， HUANG H， DONG Q S，et al.Study on stem segment induction and plant regeneration of Brachystemma calycinum D.Don［J］.Journal of Chinese Medicinal Materials，2015，38（9）：1810-1812.

[24] 李莹.瞿麦组织培养与快繁技术的研究［D］.长春：吉林农业大学，2012.

[25] LI Y.Tissue culture and rapid propagation of Dianthus superbus L.［D］.Changchun：Jilin Agricultural University，2012.

[26] 高弘扬.石竹和拟南芥试管苗玻璃化机制及控制研究［D］.大连：大连理工大学，2018.

[27] GAO H Y.Mechanism and control of hyperhydricity in Dianthus chinensis L.and Arabidopsis thaliana［D］.Dalian：Dalian University of Technology，2018.

[28] 饶雪琴，张曙光.番木瓜组织培养中玻璃化苗的发生与预防［J］.植物生理学报，2005，41（3）：331.

[29] RAO X Q， ZAHNG S G.Occurrence and prevention of vitrification seedlings in Carica papaya tissue culture［J］.Plant Physiology Journal，2005，41（3）：331.

[30] 姜琳.五星花组织培养及试管开花研究［D］.北京：北京林业大学，2018.

[31] JIANG L.Study on tissue culture and in vitro flowering of Pentas lanceolata ［D］.Beijing：Beijing Forestry University，2018.

[32] 吕侃俐.长筒花、长寿花试管开花诱导及影响因素研究［D］.北京：北京林业大学，2017.

[33] LV K L.Study on influence factors of in vitro flowering induction of Achimenes spp.and Kalanchoe blossfeldi- ana［D］.Beijing：Beijing Forestry University，2018.

[34] 毛红俊.牡丹组织培养技术及玻璃化防止措施研究［D］.洛阳：河南科技大学，2011.

[35] MAO H J.Research on tissue culture technology and vitrification prevention measure for Paeonia suffruticosa ［D］.Luoyang：Henan University of Science and Technology，2011.

[36] 韩淑兰，王慧梅，张丹.降低黄芩再生苗玻璃化率及其生根的研究［J］.植物研究，2016，36（1）：90-96.

[37] HAN S L， WANG H M， ZAHNG D.Decreasing the hyperhydricity and rooting of Scutellariae baicalensis Georgi［J］.Bulletin of Botanical Research，2016，36（1）：90-96.

[38] ZHANG J M， HUANG B， LU X X，et al.Cryopreservation of in vitro-grown shoot tips of Chinese medicinal plant Atractylodes macrocephala Koidz.using a droplet-vitrification method［J］.CryoLetters，2015，36（3）：195-204.

[39] GHASHEEM NAL， STĂNICĂ F， PETICILĂ A G，et al. In vitro influence of cultivars and different culture media on vitrification and darkness on peach （Prunus persica L.Batsch） shoots multiplication［J］.Scientific Bulletin：Series F：Biotechnologies，2022，26（1）：59-64.

[40] ROYCHOUDHRY S， KEPINSKI S.Auxin in root development［J］.Cold Spring Harbor Perspectives in Biology，2022，14（4）：309-333.

[41] 卢静洁，包希吉乐，张梦迪，等.生长调节剂对香石竹（Dianthus caryophyllus）组培苗生根的影响［J］.分子植物育种，2021，19（16）：5465-5469.

[42] LU J J， BAOXI J L， ZAHNG M D，et al.Effect of growth regulators on rooting of carnation（Dianthus caryophyllus） tissue culture seedlings［J］.Molecular Plant Breeding，2021，19（16）：5465-5469.

[43] 兰伟，蔡健，冯守平.常夏石竹的组培与快速繁殖［J］.林业科技开发，2006，20（2）：55-57.

[44] LAN W， CAI J， FENG S P.Mass propagation of Dianthus plumarius L. by tissue culture［J］.China Forestry Science and Technology，2006，20（2）：55-57.

[45] 黄冬华，周群，陶秀花，等.矮生香石竹的组织培养和快速繁殖［J］.中国农学通报，2007，23（9）：103-106.

[46] HUANG D H， ZHOU Q， TAO X H，et al.Tissue culture and rapid propagation of the short carnation［J］.Chinese Agricultural Science Bulletin，2007，23（9）：103-106.

基金资助

山西农业大学科技创新基金项目(2020BQ37)

山西农业大学研究生实践创新项目(2024SJ149)