刺梨叶中三萜类化合物的分离纯化与鉴定

Isolation, Purification and Identification of Triter-penoids from Rosa roxburghii Leaves

摘要

该研究选用多种分离方法对刺梨（Rosa roxburghii）叶中的多种三萜类化合物成分进行分离纯化，并鉴定化学结构，以期从刺梨叶中分离出新的化合物。该研究以刺梨叶为研究对象，采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、半制备液相等方法系统性地对其叶中的三萜类化学成分进行了分离纯化，通过理化性质和核磁共振波谱数据鉴定化合物结构，共分离鉴定出13个化合物。其中四环三萜类化合物2个，五环三萜糖苷类化合物 3个，五环三萜羧酸类化合物8个，包括一个全新的化合物单体。13个化合物分别为（1）β-谷甾醇、（2）胡萝卜苷、（3）2α，3α，19α-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、（4）刺梨苷、（5）野蔷薇苷、（6）野蔷薇酸、（7）新化合物、（8）山香二烯酸、（9）野鸦椿酸、（10）委陵菜酸、（11）克罗索酸、（12）白桦脂酸和（13）山楂酸，其中化合物2、6、7、8首次从该植物中分离得到。该研究明晰了刺梨叶中三萜类成分，为刺梨叶资源开发利用提供了科学依据。

Abstract

The R. roxburghii leaves were used as materials， and the triterpenoid chemical components were systematically isolated and purified from leaves by using methods of silica gel column chromatography， Sephadex LH-20 column chromatography， and semi HPLC， respectively. The structures of the compounds were identified through physicochemical properties and nuclear magnetic resonance spectroscopy （NMR） spectral data， and a total of 13 compounds were isolated and identified. Among them， there were two tetracyclic triterpenoid compounds， three pentacyclic triterpenoid glycosides， and eight pentacyclic triterpenoid carboxylic acid compounds， including a novel compound monomer. The structures identified were （1）β- sitosterol， （2）daucosterol， （3）2α，3α，19α-trihydroxyolean-12-en-28-O-β-D-glucopyranoside， （4）kaji-ichigoside F1， （5）rosamultin， （6）rosamultic acid， （7）new compound， （8）hyptadienic acid， （9）euscaphic acid， （10）tormentic acid， （11）corosolic acid， （12）betulinic acid， and （13）maslinic acid， respectively， and the compounds No.2， No.6， No.7 and No.8 were isolated and identified from this plant for the first time. This study clarified the triterpenoid components in R. roxburghii leaves， and provided scientific basis for the development and utilization of R. roxburghii leaf resources.

Graphical abstract

关键词

刺梨叶 / 三萜类化合物 / 分离 / 结构鉴定

Key words

Rosa roxburghii leaves / triterpenoid / separation / structural identification

刺梨（Rosa roxburghii），蔷薇科（Rosaceae）多年生落叶灌木，又名山王果、茨梨、木梨子等，是我国一种稀有的珍贵植物，一般生长于海拔500~ 2 500 m的向阳山坡、沟谷、路旁及灌木丛中，主要分布于我国西南地区，如贵州、云南和四川等地^［1］。刺梨的果实、叶片、根茎和花等部位均具有极高的药用价值和经济价值^［2］。

刺梨叶中含有较丰富的高营养价值与药用价值的天然活性成分，如多糖、黄酮类化合物（槲皮素、山柰酚等）^［3］、萜类化合物（刺梨苷、刺梨酸等）^［4］、酚酸类（鞣花酸、儿茶素等）^［5］和有机酸类（没食子酸、抗坏血酸等）^［6］。多种天然活性成分的存在使得刺梨叶具有极高的药用价值。研究^［3］表明，刺梨具有助消化、延缓衰老、抗肿瘤、抗癌等作用。

刺梨叶中三萜类化合物的含量较高，且种类丰富。然而，目前针对刺梨叶中三萜类化合物的研究较少，其中的具体成分等尚不清楚。因此，本研究选用多种分离方法分离刺梨叶中的三萜类化合物成分，并对其化学结构进行鉴定，以期从刺梨叶中分离到新的化合物，为刺梨叶的综合利用提供指导。

1 材料与方法

1.1　试验材料

本研究所用的刺梨叶购于贵州绿源公司（贵州，贵阳）。乙醇（分析级）、甲醇（分析级）、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯，购于北京现代东方公司（中国，北京）。甲醇（色谱级）、乙腈（色谱级）购于北京百灵威科技有限公司。氘代甲醇、氘代二甲基亚砜及氘代吡啶-d5均购于美国CIL公司。GF254薄层色谱板购于青岛海洋化工集团有限公司。柱层析用硅胶购于青岛美高集团有限公司。Sephadex LH-20购于美国Pharmacia公司。Agilent 1260半制备液相色谱，美国Agilent公司；Agilent 1260高效液相色谱系统，美国Agilent公司；600 MHz AVANCE Ⅲ HD核磁波谱仪，德国Bruke公司；0.45 μm微孔滤膜，Beyotime生物技术公司。

1.2　刺梨叶中三萜类化合物的分离纯化

将新鲜采摘的刺梨叶在烘箱中烘干，并使用粉碎机粉碎。取7 kg粉碎完成的刺梨叶，用35 L 80%乙醇浸泡3 d，共重复3次。将所得提取液减压浓缩得到提取物浓缩浸膏。将提取物浓缩浸膏加水分散之后，利用石油醚、乙酸乙酯萃取，每个步骤重复3次，合并萃取液并减压浓缩旋干得到不同组分提取物，其中石油醚层60.0 g、乙酸乙酯层126.8 g。利用大孔吸附树脂、硅胶柱色谱和半制备液相等方法分离纯化获得单体化合物（图1）。采用质谱和核磁谱图鉴定化合物结构。

2 结果与分析

2.1　三萜类化合物的分离纯化

石油醚层萃取物分离：通过硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱，得到化合物1（56 mg）和化合物2（132 mg）。

乙酸乙酯层萃取物分离：将乙酸乙酯层（126.8 g）用适量甲醇加热溶解后，采用D101大孔树脂拌样，再用大孔树脂干法上样进行柱层析分离（柱床高度33 cm，直径15 mm，样品层高度 7 cm）。采用乙醇水溶液进行梯度洗脱，梯度洗脱顺序依次为10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇和100%乙醇。将梯度洗脱的各馏分溶液浓缩后通过薄层色谱（TLC）展开，合并相似组分后，得到Fr.A、Fr.B、Fr.C共3个部分。

Fr.A部分用二氯甲烷-甲醇溶剂体系（体积比100∶0，50∶1，20∶1，10∶1，5∶1，2∶1，0∶100）进行梯度洗脱，采用200~300目硅胶柱进行柱层析分离，利用薄层色谱对得到的各馏分进行显色，合并主要部分的馏分，得到Fr.A-1~Fr.A-11共11个部分。随后对Fr.A-8部分减压浓缩过Sephdex-LH-20凝胶色谱柱V（二氯甲烷）∶V（甲醇）=1∶1洗脱，结果发现未能完全分开化合物。随后采用200~300目硅胶色谱柱进一步分离之后合并相似馏分，然后用半制备HPLC分离得到化合物3（27 mg）、化合物4（450 mg）和化合物5（110 mg）。

Fr.B部分用二氯甲烷-甲醇溶剂体系（体积比100∶0，50∶1，20∶1，10∶1，5∶1，2∶1，0∶100）进行梯度洗脱，采用200~300目硅胶柱进行柱层析分离，利用薄层色谱对得到的各馏分进行显色，合并主要部分的馏分，得到Fr.B-1~Fr.B-10共10个部分。对Fr.B-9部分用二氯甲烷-甲醇溶剂体系（体积比100∶0，50∶1，20∶1，10∶1，5∶1，2∶1，0∶100）进行梯度洗脱，对馏分进行相似合并，结果发现未能完全分开化合物。随后用半制备HPLC分离得到化合物6（13 mg）和化合物7（3 mg）。

Fr.C部分用二氯甲烷-甲醇溶剂体系（体积比100∶0，50∶1，20∶1，10∶1，5∶1，2∶1，0∶100）进行 梯度洗脱，采用200~300目硅胶柱进行柱层析分离，利用薄层色谱对得到的各馏分进行显色，合并主要部分的馏分，得到Fr.C-1~Fr.C-6共6个部分。随后用半制备HPLC对Fr.C-1分离得到化合物 8（11 mg）和化合物9（9 mg）。进一步用半制备HPLC对Fr.C-3进行分离得到化合物10（37 mg）、化合物11（28 mg）、化合物12（11 mg）、化合物13（9 mg）、化合物14（8 mg）和化合物15（8 mg）。

2.2　三萜类化合物结构鉴定结果

2.2.1　三萜类化合物1结构鉴定结果：β-谷甾醇

化合物1为白色针晶，由质谱和核磁谱图推测分子式可能为C₂₉H₅₀O。¹H NMR（800 MHz，CDCl₃） δ：5.35为H-6烯氢信号，¹H NMR（800 MHz，CDCl₃）δ：5.35（1H，dt，J=4.8，2.1 Hz），3.50~3.55（1H，m），2.19~2.33（2H，m），1.93~2.05（2H，m），1.84（3H，tq，J=12.1，5.0，4.2 Hz）；¹³C NMR（200 MHz，CDCl₃）的数据见表1，比较波谱数据与文献［3］发现，二者基本一致，因此确定化合物1为β-谷甾醇（β-sitosterol）。β-谷甾醇的化学结构式见图2。

2.2.2　三萜类化合物2结构鉴定结果：胡萝卜苷

化合物2为白色粉末，由质谱和核磁谱图推测分子式可能为C₃₅H₆₀O₆。¹H NMR（800 MHz，DMSO-d6）δ：5.33（1H，s），4.84~4.87（1H，m），4.20~4.24（1H，m），3.64（1H，d，J=11.6 Hz），3.47（1H，t， J=7.6 Hz），3.39~3.43（1H，m），3.12（1H，dt，J=9.1，5.4 Hz），3.07（1H，t，J=7.8 Hz），3.02（1H，t，J= 8.9 Hz），2.87~2.92（1H，m），2.37（1H，d，J=13.2 Hz），2.13（1H，t，J=12.6 Hz），1.96（1H，d，J=12.2 Hz），1.92（1H，d，J=17.8 Hz），1.81（2H，d，J=14.9 Hz），1.79（1H，s），1.64（1H，p，J=7.0 Hz），1.51~1.56（1H，m），1.50（1H，s），1.48（2H，d，J=10.5 Hz），1.42（1H，d，J=12.2 Hz），1.39（1H，s），1.29~1.37（2H，m），1.24（2H，dq，J=24.4，14.3，11.0 Hz），1.17~1.21（1H，m），1.12~1.17（3H，m），1.09（1H，d，J=9.7 Hz），1.06（1H，s），0.98（3H，d，J=14.2 Hz），0.96（3H，s），0.86~0.93（5H，m），0.79~0.84（8H，m），0.74~0.79（1H，m），0.65（3H，d，J=3.1 Hz）；¹³C NMR（200 MHz，DMSO-d6）的碳谱数据见表1，结果发现该化合物的波谱数据与文献［3］基本一致，因此确定化合物2为胡萝卜苷（daucosterol）。这是首次在刺梨叶中分离鉴定出胡萝卜苷这一成分。胡萝卜苷的化学结构式见图3。

2.2.3　三萜类化合物3结构鉴定结果：2α，3α，19α-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷

化合物3为白色粉末，ESI-MS m/z：673.5［M+Na］⁺，表明该化合物相对分子质量为650，经过点板发现该化合物呈紫色。¹H NMR和¹³C NMR谱结合分析，该化合物分子式可能为C₃₆H₅₈O₁₀，核磁数据显示该化合物存在1个糖信号。¹H NMR（800 MHz，Pyridine-d5）δ：6.39（1H，d，J=8.1 Hz），5.51（1H，s），3.56（1H，s），3.53（1H，s），1.14（3H，s），1.04（3H，s），0.98（3H，s），0.93（3H，s）；¹³C NMR（200 MHz，Pyridine-d5）的数据见表1，分析比对结果表明：该化合物的波谱数据与文献［7］中化学位移一致，因此确定化合物3为2α，3α，19α-三羟基齐墩果 烷-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2α，3α，19α-Trihydroxyolean-12-en-28-O-β-D-β-glucopyranoside）。2α，3α，19α-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的化学结构式见图4。

2.2.4　三萜类化合物4结构鉴定结果：刺梨苷

化合物4为白色粉末，ESI-MS m/z：673.5［M+Na］⁺，相对分子质量为650。根据¹H NMR和¹³C NMR谱结合分析，该化合物分子式可能为C₃₆H₅₈O₁₀，核磁数据显示该化合物存在着1个糖信号。¹H NMR（800 MHz，Pyridine-d5）δ：5.51（1H，s），5.46（1H，s），2.89（1H，s），2.45（1H，s），1.34（3H，s），1.22（3H，s），1.00（3H，s），0.88（3H，s）；¹³CNMR（200 MHz，Pyridine-d5）的数据见表1，分析比对结果表明：该化合物的波谱数据与文献［3］中化学位移一致，因此确定化合物4为刺梨苷（kaji-ichigoside F1），与化合物3为同分异构体。刺梨苷的化学结构式见图5。

2.2.5　三萜类化合物5结构鉴定结果：野蔷薇苷

化合物5为白色粉末，ESI-MS m/z：673.5［M+Na］⁺，表明化合物5的相对分子质量为650，核磁 数据显示该化合物存在1个糖信号。¹H NMR（800 MHz，Pyridine-d5）δ：6.33（1H，d，J=6.5 Hz），5.55（1H，d，J=5.1 Hz），3.40（1H，d，J=7.5 Hz），2.94（1H，s），1.69（3H，s），1.40（3H，s），1.26（3H，s），1.23（3H，s），1.11（3H，s）；¹³C NMR（200 MHz，Pyridine-d5）的数据见表1，分析比对结果表明：该化 合物的波谱数据与文献［3］中化学位移一致，因 此确定化合物5为野蔷薇苷（rosamultin），与化合物3、4为同分异构体。野蔷薇苷的化学结构式见图6。

2.2.6　三萜类化合物6结构鉴定结果：野蔷薇酸

化合物6为白色粉末，ESI-MS m/z：509［M+Na］⁺，相对分子质量为486。¹H NMR和¹³C NMR谱结合分析，表明该化合物分子式为C₃₀H₄₆O₅。¹H NMR（800 MHz，Pyridine-d5）δ：6.12（1H，s），5.62（1H，s），4.63（1H，d，J=16.8 Hz），4.49（1H，d， J=14.9 Hz），4.05（1H，d，J=10.4 Hz），3.85（1H，d， J=10.4 Hz），3.05（1H，s），1.72（3H，s），1.48（3H，s），1.43（3H，s），1.25（3H，s），1.16（3H，s），1.11（3H，d，J=6.7 Hz）。6.12为3号位上的H信号，5.62为12号位上的H信号，4.63和4.49为1号位上的H信号，所以裂分成了二重峰。4.05和3.85为24号位上的H信号，同样裂分成了二重峰，3.05为18号位上的H信号，1.72为27号位上的甲基H信号，1.48为23号位上的甲基H信号，1.43为29号位上的甲基H信号，1.25为25号位上的甲基H信号，1.16为26号位上的甲基H信号，1.11为30号位上的甲基H信号；¹³C NMR（200 MHz，Pyridine-d5）的数据见表2，其中180.67（C-28）是羧基碳信号，分析比较结果发现：该化合物的核磁波谱数据与文献［7］中化学位移一致，因此确定化合物6为野蔷薇酸（rosamultic acid）。这是首次在刺梨叶中分离鉴定出野蔷薇酸这一成分。野蔷薇酸的化学结构式见图7。

2.2.7　三萜类化合物7结构鉴定结果：新化合物

化合物7为白色粉末，ESI-MS m/z：509［M+Na］⁺，表明化合物7相对分子质量为486。¹H NMR和¹³C NMR谱结合分析，表明该化合物分子式为C₃₀H₄₆O₅。¹H NMR（800 MHz，Pyridine-d5）δ：6.08（1H，s），5.61（1H，s），4.60（1H，d，J=14.5 Hz），4.51（1H，d，J=14.2 Hz），4.05（1H，d，J=10.4 Hz），3.86（1H，d，J=10.2 Hz），1.72（3H，s），1.46（3H，s），1.26（3H，s），1.20（3H，s），1.13（3H，s），1.10（3H，s）。6.08为3号位上的H信号，5.61为12号位上的H信号，4.60和4.51为1号位上的H信号，所以裂分成了二重峰。4.05和3.86为24号位上的H信号，同样裂分成了二重峰，1.72为27号位上的甲基H信号，1.46为23号位上的甲基H信号，1.26为29号位上的甲基H信号，1.20为25号位上的甲基H信号，1.13为26号位上的甲基H信号，1.10为30号位上的甲基H信号；¹³C NMR（200 MHz，Pyridine-d5）的数据见表2。因为29号位上的甲基由19号碳转移到了20号碳，所以，相较于野蔷薇酸，18号碳的化学位移由54.81降低到45.16。类似地，19号碳的化学位移由72.66上升到81.11，20号碳的化学位移由42.35降低到35.72，21号碳的化学位移由27.16上升到29.15，22号碳的化学位移由38.52降低到33.70，29号碳的化学位移由26.95上升到28.89，0号碳的化学位移由16.78上升到25.02，其中180.94（C-28）是羧基碳信号。由DEPT 90°、DEPT 135°、HMBC、COSY谱图发现，12号和3号碳为叔碳，化学位移为132.09，19号、5号、18号、9号碳的化学位移分别为81.11、63.83、45.15、44.44。故鉴定化合物7为野蔷薇酸同分异构体，为新化合物。此新化合物的化学结构式见图8。

2.2.8　三萜类化合物8结构鉴定结果：山香二烯酸

化合物8为白色针晶，ESI-MS m/z：469［M-H］^-，推测化合物8的相对分子质量为470。¹H NMR和¹³C NMR谱结合分析，该化合物分子式为C₃₀H₄₆O₄。¹H NMR（800 MHz，Pyridine-d5）δ：5.76（1H，s），4.58（1H，s），4.56（1H，s），3.06（1H，s），1.72（3H，s），1.43（3H，s），1.18（3H，s），1.12（3H，d，J=6.2 Hz），1.10（3H，s），0.99（3H，s）。0.99为23号位上的甲基H信号，1.10为24号位上的甲基H信号，1.12为30号位上的甲基H信号，1.18为26号位上的甲基H信号，1.43为27号位上的甲基H信号，1.72为29号位上的甲基H信号，3.06为18号位上的H信号，4.58和4.56为1号位上的H信号，所以裂分成了二重峰，5.76为3号位上的H信号；¹³C NMR（200 MHz，Pyridine-d5）的数据见表2，其中180.66（C-28）是羧基碳信号，分析比较结果发 现：该化合物的核磁波谱数据与文献［8］中化学 位移一致，确定化合物8为山香二烯酸（hyptadienic acid）。这是首次在刺梨叶中分离鉴定出山香二烯酸这一成分。山香二烯酸的化学结构式见图9。

2.2.9　三萜类化合物9结构鉴定结果：野鸦椿酸

化合物9为白色粉末，ESI-MS m/z：487［M-H］^-，相对分子质量为488。¹H NMR和¹³C NMR谱结合分析，该化合物分子式为C₃₀H₄₈O₅。¹H NMR（800 MHz，CD₃OD）δ：5.29（1H，s），3.93（1H，d，J=12.0 Hz），3.33（1H，s），2.50（1H，s），1.35（3H，s），1.19（3H，s），0.93（3H，d，J=6.7 Hz），0.87（3H，s），0.79（3H，s）；¹³C NMR（200 MHz，CD₃OD）的数据见表2，比较分析结果发现：该化合物的核磁波谱数据与文献［9］中化学位移基本一致，确定化合物9为野鸦椿酸（euscaphic acid）。野鸦椿酸的化学结构式见图10。

2.2.10　三萜类化合物10结构鉴定结果：委陵菜酸

化合物10为白色粉末，ESI-MS m/z：487［M-H］^-，相对分子质量为488。¹H NMR和¹³C NMR谱结合分析，该化合物分子式可能为C₃₀H₄₈O₅。¹H NMR（800 MHz，CD₃OD）δ：5.30（1H，s），3.62（1H，ddd，J=11.4，9.5，4.5 Hz），2.50（1H，s），1.33（3H，s），1.19（3H，s），1.02（3H，s），1.00（3H，s），0.93（3H， d，J=6.7 Hz），0.81（3H，s），0.80（3H，s）；¹³C NMR（200 MHz，CD₃OD）的数据见表2，比较分析结果发现：该化合物的核磁波谱数据与文献［10］中化学位移基本一致，确定化合物10为委陵菜酸（tormentic acid），与化合物9为同分异构体。委陵菜酸的化学结构式见图11。

2.2.11　三萜类化合物11结构鉴定结果：克罗索酸

化合物11为白色粉末，ESI-MS m/z：471.5［M-H］^-，相对分子质量为472。¹H NMR和¹³C NMR谱结合分析表明，该化合物分子式可能为C₃₀H₄₈O₄。¹H NMR（800 MHz，Pyridine-d5）δ：5.48（1H，s），1.29（3H，s），1.22（3H，s），1.09（3H，s），1.06（3H，s），0.96（3H，s）；¹³C NMR（200 MHz，Pyridine-d5）δ：17.03（C-24），17.53（C-25），17.56（C-26），17.76（C-29），18.89（C-6），21.45（C-30），23.78（C-11），23.95（C-27），24.95（C-16），28.69（C-15），29.42（C-23），31.12（C-21），33.56（C-7），37.49（C-22），38.48（C-10），39.45（C-20），39.52（C-19），39.89（C-4），40.08（C-8），42.59（C-14），48.05（C-1），48.08（C-9），48.14（C-17），53.57（C-18），55.96（C-5），68.63（C-2），83.88（C-3），125.60（C-12），139.34（C-13），179.93（C-28）。比较分析结果发现：该化合物的核磁波谱数据与文献［7］中的化学位移基本一致，确定化合物11为克罗索酸（corosolic acid）。克罗索酸的化学结构式见图12。

2.2.12　三萜类化合物12结构鉴定结果：白桦脂酸

化合物12为白色粉末，ESI-MS m/z：455.3［M-H］^-，相对分子质量为456。¹H NMR和¹³C NMR谱结合分析，化合物分子式可能为C₃₀H₄₈O₃。¹H NMR（800 MHz，CDCl₃）δ：4.74（1H，s），4.61（1H，s），3.19（1H，d，J=11.8 Hz），0.94（3H，s），0.82（3H，s），0.75（3H，s）；¹³C NMR （200 MHz，CDCl₃） δ：38.89（C-1），27.42（C-2），79.03（C-3），38.74（C-4），55.37（C-5），18.31（C-6），34.35（C-7），40.72（C-8），50.55（C-9），37.23（C-10），20.88（C-11），25.53（C-12），38.41（C-13），42.47（C-14），29.73（C-15），32.18（C-16），56.30（C-17），46.91（C-18），49.29（C-19），150.44（C-20），30.57（C-21），37.05（C-22），28.01（C-23），16.15（C-24），15.37（C-25），16.05（C-26），14.72（C-27），179.88（C-28），109.73（C-29），19.40（C-30）。比较分析结果发现：该化合物的核磁波谱数据与文献［3］中的化学位移一致，确定化合物12为白桦脂酸（betulinic acid）。白桦脂酸的化学结构式见图13。

2.2.13　三萜类化合物13结构鉴定结果：山楂酸

化合物13为白色粉末，ESI-MS m/z：471.7［M-H］^-，相对分子质量为472。¹H NMR和¹³C NMR谱结合分析表明，该化合物分子式可能为C₃₀H₄₈O₄。¹H NMR（800 MHz，CD₃OD）δ：5.25（1H，s），3.61（1H，s），2.90（1H，d，J=9.7 Hz），2.85（1H，d，J=13.6 Hz），1.17（3H，s），1.01（3H，s），1.00（3H，s），0.94（3H，s），0.91（3H，s），0.81（3H，s），0.81 （3H，s）；¹³C NMR（200 MHz，CD₃OD）δ：181.86（C-28），145.38（C-13），123.52（C-12），84.51（C-3），69.53（C-2），56.74（C-5），48.18（2C，C-1，C-9），47.67（C-17），47.28（C-19），42.99（C-18），42.77（C-14），40.64（C-4），40.55（C-8），39.30（C-10），34.94（C-21），33.96（C-29），33.86（C-7），33.60（C-22），31.67（C-20），29.34（C-23），28.84（C-15），26.46（C-27），24.66（C-16），24.09（C-30），24.02（C-11），19.61（C-6），17.77（C-24），17.49（C-26），17.12（C-25）。比较分析结果发现：该化合物的核磁波谱数据与文献［11］中的化学位移基本一致，确定化合物13为山楂酸（maslinic acid）。山楂酸的化学结构式见图14。

2.2.14　三萜类化合物14结构鉴定结果

化合物14为白色粉末，溶于甲醇，10%硫酸乙醇显色呈紫红色，推测为三萜类物质，结构正在解析中。ESI-MS m/z：455.2［M-H］^-，相对分子质量为456。¹H NMR（800 MHz，CD₃OD）δ：5.24（1H，s），3.14（1H，d，J=14.4 Hz），1.16（3H，s），0.97（3H，d， J=2.8 Hz），0.94（6H，s），0.91（3H，s），0.82（3H，s），0.77（3H，s）；¹³C NMR（200 MHz，CD₃OD）的数据见表2。

2.2.15　三萜类化合物15结构鉴定结果

化合物15为白色粉末，溶于甲醇，10%硫酸乙醇显色呈紫红色，推测可能为三萜类物质，结构有待解析。

3 结论

本研究通过多种分离方法对刺梨叶三萜类物质进行了系统的分离纯化，共获得15个三萜类单体化合物，并鉴定出13个单体成分结构，分别为（1）β-谷甾醇、（2）胡萝卜苷、（3）2α，3α，19α-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、（4）刺梨苷、（5）野蔷薇苷、（6）野蔷薇酸、（7）新化合物、（8）山香二烯酸、（9）野鸦椿酸、（10）委陵菜酸、（11）克罗索酸、（12）白桦脂酸和（13）山楂酸。其中化合物2、6、7、8首次从刺梨中分离得到，而化合物7是全新的化合物单体，此前未见报道。另外 2个单体化合物14、15的结构正在鉴定中。

综上，本研究通过刺梨叶中三萜类化学成 分的分离纯化和结构鉴定，明确了其成分物质 基础，对刺梨叶资源的综合利用具有一定的指 导意义。

参考文献

[1] 赵心然，罗芳思，王恒松.刺梨植物在园林中的应用［J］.现代园艺，2024（11）：132-136.

[2] ZHAO X R， LUO F S， WANG H S. Application of Rosa roxburghii Tratt. in the garden［J］. Modern Horticulture，2024（11）：132-136.

[3] 徐启红，任平国.刺梨多糖提取工艺优化及抗氧化活性研究［J］.饲料工业，2024，45（16）：103-109.

[4] XU Q H， REN P G. Optimization of extraction process and antioxidant activity of Rosa roxburghii polysaccharides［J］. Feed Industry，2024，45（16）：103-109.

[5] 方玉梅，吴廷贵，韩世明，等.贵州野生刺梨叶黄酮的纯化工艺研究［J］.饲料研究，2024（10）：99-104.

[6] FANG Y M， WU T G， HAN S M，et al. Study on purification process of flavonoids from wild Rosa roxburghii Tratt. leaves in Guizhou［J］. Feed Research，2024（10）：99-104.

[7] 樊卫国，周禹佳.刺梨叶、花瓣和果实的多酚及三萜组分、含量及其提取物的抗氧化特性［J］.贵州大学学报（自然科学版），2022，39（5）：13-21.

[8] FAN W G， ZHOU Y J. The components，contents of polyphenols，triterpenoids in leaf，petal，fruit of Rosa roxburghii and the antioxidant properties of their extracts［J］. Journal of Guizhou University （Natural Sciences），2022，39（5）：13-21.

[9] 谢国芳，徐小燕，王瑞，等.金刺梨果实和叶中酚类、 Vc含量及其抗氧化能力分析［J］.植物科学学报，2017，35（1）：122-127.

[10] XIE G F， XU X Y， WANG R，et al. Analysis of phenolic，Vc and antioxidant activity of fruits and leaves of Rosa sterilis D.Shi［J］. Plant Science Journal，2017，35（1）：122-127.

[11] 王媛媛，雷艳，马雪，等.刺梨叶质量标准研究［J］.中国药业，2019，28（13）：36-38.

[12] WANG Y Y， LEI Y， MA X，et al. Quality standard of Rosa roxburghii leaves［J］. China Pharmaceuticals，2019， 28（13）：36-38.

[13] 梁勇，李良群，王丽. 民族药刺梨根茎化学成分及其抗炎活性研究［J］.广西植物，2022，42（9）：1531-1541.

[14] LIANG Y， LI L Q， WANG L. Chemical constituents and their anti-inflammatory activities from rhizome of ethnic medicine Rosa roxburghii ［J］. Guihaia，2022，42（9）：1531-1541.

[15] 黄小燕，马国需，陈路.小果蔷薇根的化学成分研究［J］.中草药，2018，49（13）：2978-2983.

[16] HUANG X Y， MA G X， CHEN L. Chemical constituents from roots of Rosa cymosa ［J］. Chinese Traditional and Herbal Drugs，2018，49（13）：2978-2983.

[17] TANIGUCHI S， IMAYOSHI Y， KOBAYASHI E，et al. Production of bioactive triterpenes by Eriobotrya japonica calli［J］. Phytochemistry，2002，59（3）：315-323.

[18] 郑光海，朴惠顺. 朝天委陵菜化学成分研究［J］. 中草药，2012，43（7）：1285-1288.

[19] ZHENG G H， PIAO H S. Study on chemical constituents from Potentilla supina ［J］. Chinese Traditional and Herbal Drugs，2012，43（7）：1285-1288.

[20] 吴培楠，段宏泉，姚智. 蛇莓中具有抗癌活性的三萜类成分［J］. 中草药，2007（9）：1311-1313.

[21] WU P N， DUAN H Q， YAO Z. Triterpenoids in snakeberry with anticancer activity［J］. Chinese Traditional and Herbal Drugs，2007（9）：1311-1313.

基金资助

国家雄安科技创新项目(2022XACX1100)

北京林业大学“5⋅5工程”科研创新团队项目(BLRC2023A01)