微小RNA-154-5p通过靶向作用于E2F5对骨肉瘤细胞生物活性的影响及其机制

摘要

目的 探讨微小RNA-154-5p(miR-154-5p)靶向E2F5对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 MiR-154-5p转染骨肉瘤细胞MG63后，CCK-8法检测细胞增殖变化情况，Transwell细胞迁移实验评估细胞迁移及侵袭能力的改变，流式细胞仪检测细胞凋亡的水平，Western blot检测凋亡相关标志性分子B细胞淋巴瘤2蛋白关联X蛋白(Bax)、Cleaved caspase 3、B细胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)表达的变化，生物信息学技术及双荧光素酶报告基因分析miR-154-5p的潜在靶基因。结果 CCK-8检测结果显示，空白组、阴性对照组、miR-154-5p模拟组干预72 h后吸光度值分别为1.179±0.026、1.161±0.024、0.502±0.015,后者明显降低(F=2 533.000,P<0.001)。Transwell细胞迁移实验结果显示，空白组、阴性对照组、miR-154-5p模拟组干预72 h后MG63细胞迁移数量分别为79.80±8.53、76.20±6.38、49.60±3.05,后者明显减少(F=33.260,P<0.001)。流式细胞仪检测结果显示，空白组、阴性对照组、miR-154-5p模拟组干预72 h后MG63细胞凋亡率分别为(4.56±1.04)%、(4.25±1.02)%、(18.12±1.90)%,后者明显上升(F=99.400,P<0.001)。Western blot进一步检测发现，空白组、阴性对照组、miR-154-5p模拟组干预72 h后Bax、Cleaved caspase 3、Bcl-2表达明显增加(Bax:0.124±0.010、0.128±0.013、0.364±0.018;Cleaved caspase 3:0.099±0.020、0.112±0.033、0.513±0.024;Bcl-2:0.672±0.015、0.675±0.017、0.245±0.028;F=188.200,P<0.001;F=159.200,P<0.001;F=281.600,P<0.001)。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析结果显示，E2F5为miR-154-5p潜在的靶基因。结论 MiR-154-5p可以通过抑制E2F5促进骨肉瘤细胞凋亡以及抑制细胞增殖。

关键词

骨肉瘤 / 微小RNA / 凋亡 / 增殖 / 侵袭