蛋白酶体抑制剂MG132对人胃癌细胞MGC-803自噬、凋亡和迁移的影响

摘要

目的 探究蛋白酶体抑制剂MG132对人胃癌细胞MGC-803自噬、凋亡和迁移的影响，分析其对上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达的影响。方法 应用0.25μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL和2.00μg/mL的MG132处理MGC-803细胞后，用激光共聚焦显微镜检测自噬小体数目的变化以分析其对自噬的影响，通过流式细胞仪检测细胞凋亡比例的变化，并通过Transwell细胞迁移实验检测MG132对细胞迁移能力的影响。通过免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白和EMT相关蛋白表达的变化。结果 在MGC-803细胞中，与空白对照组比较，随着MG132药物浓度的升高，MG132对MGC-803细胞具有毒性作用；1.00μg/mL的MG132明显增加MGC-803细胞的自噬小体数目(1.00μg/mL:t=9.459,P=0.011);随着MG132浓度的升高，细胞凋亡比例明显增多(0.25μg/mL:t=5.149,P=0.036;0.50μg/mL:t=7.342,P=0.018;1.00μg/mL:t=15.340,P=0.004);Western blotting发现MG132处理MGC-803细胞后，随着药物浓度的增加，BAX表达明显增加(0.25μg/mL:t=4.646,P=0.043;0.50μg/mL:t=4.610,P=0.044;1.00μg/mL:t=10.760,P=0.009),Bcl-2表达明显降低(0.25μg/mL:t=22.850,P=0.002;0.50μg/mL:t=26.780,P=0.001;1.00μg/mL:t=29.890,P=0.001);随着MG132浓度的升高，迁移细胞数目明显减少(0.25μg/mL:t=16.730,P=0.004;0.50μg/mL:t=27.340,P=0.001;1.00μg/mL:t=32.800,P<0.001);0.50μg/mL浓度MG132改变EMT相关蛋白表达水平，E-钙黏蛋白表达明显升高(0.50μg/mL:t=4.405,P=0.048;1.00μg/mL:t=12.170,P=0.007),N-钙黏蛋白(0.50μg/mL:t=5.163,P=0.036;1.00μg/mL:t=6.811,P=0.021)和波形蛋白(0.50μg/mL:t=5.628,P=0.030;1.00μg/mL:t=12.670,P=0.006)表达明显降低。结论 MG132处理人胃癌细胞MGC-803能促进细胞自噬和凋亡，并通过EMT进程抑制细胞迁移。

关键词

蛋白酶体抑制剂 / 胃癌 / 自噬 / 凋亡 / 迁移