甲基转移酶样蛋白3通过N6-甲基腺嘌呤修饰调控分泌型磷蛋白1表达对食管鳞癌进展的影响

摘要

目的 探讨甲基转移酶样蛋白3(METTL3)通过N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰调控分泌型磷蛋白1(SPP1)影响食管鳞癌(ESCC)恶性进展的分子机制。方法 通过网站预测METTL3与SPP1的相互作用。在人ESCC细胞中敲低METTL3(sh-METTL3组),以逆转录实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测METTL3及SPP1的表达；用RNA甲基化免疫沉淀和放线菌素D实验分别评估SPP1 m6A修饰水平及SPP1 mRNA稳定性。同时过表达SPP1(oe-SPP1组),设置敲低对照组(sh-NC组)、sh-METTL3组、共转染sh-METTL3和空载体组(sh-METTL3+oe-NC组)、共转染sh-METTL3和SPP1过表达质粒组(sh-METTL3+oe-SPP1组)4组，通过菌落形成实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术实验检测ESCC细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡能力。结果 SPP1存在m6A修饰位点且与METTL3结合。sh-METTL3组METTL3 mRNA、蛋白表达均低于sh-NC组(t=8.345,P<0.001;t=8.660,P<0.001);SPP1 mRNA、蛋白表达均低于sh-NC组(t=4.703,P<0.001;t=7.510,P<0.001);SPP1 m6A水平低于sh-NC组(t=8.980,P<0.001);放线菌素D处理3、6、9 h后，sh-METTL3组SPP1 mRNA相对表达量均低于sh-NC组(3 h:t=4.930,P<0.001;6 h:t=5.910,P<0.001;9 h:t=8.190,P<0.001)。过表达SPP1后，oe-SPP1组SPP1 mRNA、蛋白水平均高于oe-NC组(t=13.040,P<0.001;t=9.220,P<0.001);sh-METTL3组细胞菌落数目、迁移率、侵袭细胞数均低于sh-NC组(t=10.900,P<0.001;t=11.470,P<0.001;t=12.916,P<0.001),凋亡率高于sh-NC组(t=11.006,P<0.001);sh-METTL3+oe-SPP1组细胞菌落数目、迁移率、侵袭细胞数均高于sh-METTL3+oe-NC组(t=6.228,P<0.001;t=9.420,P<0.001;t=9.862,P<0.001),凋亡率低于sh-METTL3+oe-NC组(t=7.858,P<0.001)。结论 METTL3通过调控SPP1的m6A水平，促进ESCC的恶性进展。

关键词

甲基转移酶样蛋白3 / 分泌型磷蛋白1 / 食管鳞癌 / 增殖 / 侵袭

基金资助

河南省医学科技攻关计划项目(LHGJ20230972); 中原学者工作站项目(254400510011); 南阳市基础与前沿技术研究专项计划项目(23JCQY2043)