分化拮抗非蛋白编码RNA调节微小RNA-758-3p/KLF12轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

摘要

目的 探讨分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)调节微小RNA(miR)-758-3p/KLF12轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法 通过逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人CRC系DANCR、miR-758-3p、KLF12 mRNA的异常表达；将人CRC系HCT116细胞随机分为空白组、pcDNA组、pcDNA-DANCR组、si-NC组、si-DANCR组、NC-anti组、anti-miR-758-3p组、si-DANCR+anti-miR-758-3p组，分组转染后以RT-qPCR与双荧光素酶报告基因实验验证DANCR对miR-758-3p/KLF12轴的靶向调节作用；以腺苷三磷酸(ATP)生物荧光法、Edu染色、平板克隆实验检测细胞增殖；以流式细胞术检测细胞凋亡；以体外三维培养、成管实验检测细胞血管生成；以Transwell实验检测细胞侵袭；基于异种移植瘤裸鼠模型检测DANCR调节miR-758-3p/KLF12轴对实体肿瘤生长、血管生成的影响。结果 Lovo、LS174T、HCT116细胞DANCR、KLF12 mRNA均高于FHC(P均<0.001),miR-758-3p mRNA均低于FHC(P均<0.001)。pcDNA-DANCR组DANCR、KLF12 mRNA表达均高于空白组(P均<0.001),miR-758-3p mRNA表达低于空白组(P<0.001);si-DANCR组DANCR、KLF12 mRNA表达均低于空白组(P均<0.001),miR-758-3p mRNA表达高于空白组(P<0.001)。DANCR、KLF12野生型质粒联合miR-758-3p模拟物共转染细胞荧光素酶相对活性均低于联合miR-758-3p模拟物阴性对照共转染细胞(t=15.702,P<0.001;t=14.946,P<0.001)。si-DANCR组增殖率、Edu阳性率、克隆形成率均低于空白组(P均<0.001),凋亡率高于空白组(P<0.001);anti-miR-758-3p组增殖率、Edu阳性率、克隆形成率均高于空白组(P均<0.001),凋亡率低于空白组(P<0.001);si-DANCR+anti-miR-758-3p组增殖率、Edu阳性率、克隆形成率均高于si-DANCR组(P均<0.001),凋亡率低于si-DANCR组(P<0.001)。si-DANCR组管分支数、VM管腔数、侵袭数均低于空白组(P均<0.001);anti-miR-758-3p组管分支数、VM管腔数、侵袭数均高于空白组(P均<0.001);si-DANCR+anti-miR-758-3p组管分支数、VM管腔数、侵袭数均高于空白组si-DANCR组(P均<0.001)。DANCR敲低组肿瘤质量、肿瘤体积、CD31阳性表达均低于对照组(P均<0.001),miR-758-3p下调组肿瘤质量、肿瘤体积、CD31阳性表达均高于对照组(P均<0.001);DANCR敲低与miR-758-3p下调组肿瘤质量、肿瘤体积、CD31阳性表达均高于DANCR敲低组(P均<0.001)。结论 DANCR可通过靶向调节miR-758-3p/KLF12轴而促进CRC细胞增殖及侵袭，并促进其凋亡。

关键词

分化拮抗非蛋白编码RNA / 微小RNA-758-3p/KLF12 / 结直肠癌 / 增殖 / 凋亡 / 侵袭

基金资助

河南省医学科技攻关计划项目(LHGJ20240819)