泛素特异性蛋白酶5通过去泛素化表皮生长因子受体促进食管鳞癌细胞放疗耐受性及迁移侵袭的机制研究

摘要

目的 探讨泛素特异性蛋白酶5(USP5)通过去泛素化表皮生长因子受体(EGFR)促进食管鳞癌(ESCC)细胞放疗耐受性及迁移侵袭的机制。方法 用蛋白免疫印记法检测EGFR和USP5蛋白表达水平；用UbiBrowser数据库预测EGFR的泛素化；用细胞转染实现ESP5的敲减和EGFR的过表达；用免疫共沉淀(Co-IP)和免疫沉淀(IP)验证EGFR和USP5之间的相互作用；用流式细胞术、Transwell实验检测食管上皮细胞系(HET-1)和ESCC细胞系(KYSE-150)的凋亡、迁移和侵袭能力。结果 KYSE-150细胞EGFR、USP5蛋白水平均高于HET-1(t=7.739,P=0.002;t=7.335,P=0.002)。敲减USP5后，KYSE-150细胞内EGFR、USP5蛋白水平均低于敲减前(t=11.360,P<0.001;t=5.814,P=0.004)。Co-IP结果显示，USP5能与EGFR蛋白稳定结合；IP结果证实，敲减USP5,KYSE-150细胞EGFR蛋白富集水平低于敲减前(t=12.800,P<0.001)。在2、4、8 Gy射线处理下，敲减USP5后，KYSE-150细胞存活率均低于非靶向小发卡RNA组(2 Gy:t=3.639,P=0.002;4 Gy:t=12.700,P<0.001;8 Gy:t=5.511,P<0.001);而敲减USP5联合过表达EGFR后，KYSE-150细胞存活率均高于敲减USP5时(2 Gy:t=0.320,P=0.760;4 Gy:t=9.409,P<0.001;8 Gy:t=7.348,P=0.002)。流式细胞术结果显示，在2、4 Gy射线处理下，敲减USP5后，KYSE-150细胞凋亡率均高于非靶向小发卡RNA、空载体的双阴性对照组(2 Gy:t=11.740,P<0.001;4 Gy:t=9.157,P<0.001);而敲减USP5联合过表达EGFR后，KYSE-150细胞凋亡率均低于敲减USP5时(2 Gy:t=5.299,P<0.006;4 Gy:t=6.729,P=0.003)。Transwell实验结果显示，敲减USP5后，KYSE-150细胞迁移、侵袭能力均低于敲减前(t=8.450,P=0.001;t=9.206,P<0.001);而USP5敲减联合EGFR过表达后，KYSE-150细胞迁移、侵袭能力均高于USP5敲减时(t=3.712,P=0.020;t=13.420,P<0.001)。结论 USP5通过对EGFR的去泛素化调控，影响ESCC细胞的生物学功能。USP5敲减可增强ESCC细胞对放疗的敏感性，而EGFR过表达可部分逆转这一效应。

关键词

食管鳞癌 / 表皮生长因子受体 / 泛素特异性蛋白酶5 / 去泛素化 / 放疗

基金资助

河南省医学科技攻关项目(LHGJ20230972); 中原学者工作站项目(254400510011); 南阳市基础与前沿技术研究计划项目(JCQY020)