槟榔提取物对口腔上皮细胞生物功能影响的研究

摘要

目的 探讨槟榔提取物（ANE）对人口腔上皮细胞的生物学功能影响。方法 本研究首先分析了梯度浓度ANE下对人口腔角质细胞（HOK）增殖的影响；采用第二代RNA测序分析对照组与ANE干预组HOK细胞的差异表达基因。随后，流式细胞术用于检测HOK细胞周期和凋亡；β-半乳糖苷酶（β-Gal）染色试剂盒用于检测细胞衰老；免疫荧光实验检测HOK细胞中Ki67和γH2AX蛋白的表达；实时聚合酶链反应（RT-PCR）用于检测衰老相关表型基因白细胞介素（IL）-6、基质金属蛋白酶-2 (MMP2)和TGFB1表达；免疫印迹用于检测自噬相关蛋白（LC3-Ⅰ/Ⅱ和p62）和上皮间充质转化（EMT）相关蛋白（SMAD2、p-SMAD2、E-Cadherin和Vimentin）的表达；酶联免疫吸附实验用于检测HOK细胞外分泌蛋白TGFB1表达。结果 测序结果显示ANE可引起HOK细胞细胞周期、p53、自噬、FoxO、细胞衰老等信号通路相关基因异常表达。流式细胞术显示ANE可诱导HOK细胞凋亡和G2/M期阻滞。与对照组相比，ANE处理后的HOK细胞衰老细胞数量增加，衰老相关表型基因IL-6、MMP2和TGFB1表达上调。此外，相较于对照组，ANE组中HOK细胞的γH2AX、LC3-Ⅱ、TGFB1、p-SMAD2和Vimentin蛋白表达增加，Ki67蛋白、LC3-Ⅰ和E-Cadherin蛋白表达下降。结论 ANE可诱导HOK细胞凋亡、G2/M期阻滞、衰老、DNA损伤、自噬和EMT，形成促癌的细胞微环境。

关键词

槟榔 / 槟榔提取物 / 口腔角质细胞 / 细胞衰老 / 周期阻滞 / 自噬 / 上皮间充质转化