亲和超滤—液质联用技术筛选千金子二萜醇酯类成分群中泻下逐水有效成分

摘要

目的 采用亲和超滤—液质联用（UF-LC-MS）、分子对接技术和体外细胞实验筛选千金子二萜醇酯成分群中泻下逐水的有效成分。方法 以水通道蛋白3（AQP3）为靶点，采用UF-LC-MS筛选并鉴定千金子二萜醇酯类成分群中泻下逐水的有效成分，应用分子对接技术研究筛选得到的成分与AQP3的结合机制，应用噻唑蓝（MTT）和蛋白免疫印迹（Western blot）实验验证筛选得到的成分对HEK293细胞和IEC-6细胞中AQP3表达的影响。结果 千金子素L₁、L₂、L₃、L_7a、L_7b、L₈与AQP3具有较强的结合力，相对结合强度分别为4.65、3.23、3.62、2.81、3.23、2.56。分子对接结果显示，千金子素L₁、L₂、L₃、L_7a、L_7b、L₈与AQP3均具有较强的结合活性，可通过氢键和疏水相互作用与AQP3结合。体外细胞实验结果表明千金子素L₁、L₂、L₃、L_7a、L_7b、L₈在12.5～100μmol/L浓度范围内能够显著降低HEK293细胞和IEC-6细胞的存活率（P<0.01），且6种二萜醇酯类成分以25μmol/L和50μmol/L作用于HEK293细胞和IEC-6细胞48 h后AQP3的蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 千金子素L₁、L₂、L₃、L_7a、L_7b、L₈均能够显著抑制AQP3蛋白表达，可为千金子泻下逐水药效作用机制和质量控制研究提供有价值的参考。

关键词

千金子 / 二萜醇酯 / 亲和超滤—液质联用 / 分子对接 / 水通道蛋白3

基金资助

国家自然科学基金(82374040); 北京市科技新星计划项目(20240484548); 中央高校基本科研业务费专项基金(2024-JYB-JBZD-047); 国家中医药管理局高水平建设学科项目(zyyzdxk-2023272)