大剂量放射鼻咽癌细胞后衍生外泌体对树突状细胞成熟及功能的研究

摘要

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）的放射治疗不仅直接杀伤肿瘤细胞，还会影响肿瘤微环境中的免疫应答。然而，放疗后肿瘤细胞通过外泌体（tumor-derived exosomes,TDEs）介导的免疫调控机制尚未得到充分阐明。本研究以NPC细胞系5-8F为模型，采用0、2和10 Gy电离辐射后常规培养48 h，分离并鉴定辐射后5-8F来源的TDEs(5-8F-TDEs)，通过免疫印迹（western blot,WB）、纳米颗粒追踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）及透射电镜验证其典型外泌体特征。以人外周血单个核细胞诱导获得未成熟树突状细胞（immature dendritic cells,imDCs），并与不同剂量辐射后的5-8F-TDEs共培养。通过流式细胞术分析树突状细胞（dendritic cells,DCs）表面分子表达，利用激光共聚焦显微镜观察TDEs摄取情况，采用Transwell实验评估迁移能力，并检测cGAS-STING信号通路相关蛋白表达及其抑制剂作用。结果显示，5-8F-TDEs呈典型杯托状双层膜结构并表达CD9、CD63、CD81等标志蛋白；imDCs可有效摄取TDEs。与低剂量组相比，大剂量放射（10 Gy）来源的5-8F-TDEs显著上调DCs的CD80、CD86、HLA-DR和CD83表达，促进其迁移，并增强cGAS及磷酸化干扰素基因刺激因子（stimulator of interferon genes,STING）的表达；STING抑制剂可显著削弱该迁移效应。本研究成功建立了放射后NPC细胞外泌体调控DCs功能的体外模型，揭示了大剂量放射后的5-8F-TDEs可通过激活cGAS-STING通路促进DCs成熟与迁移。本研究探讨了NPC放射治疗与抗肿瘤预后应答的关系，为理解放疗过程中肿瘤免疫微环境的动态变化提供了新依据，并为NPC放射治疗提供了实验依据。

关键词

鼻咽癌 / 放疗 / 肿瘤来源外泌体 / 树突状细胞