下调USP46通过抑制NLRP3去泛素化减轻细胞焦亡改善肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤

摘要

目的 探讨泛素特异性蛋白酶46(USP46)在缺氧/复氧（H/R）诱导的肾小管上皮细胞焦亡中的作用和机制。方法 将肾小管上皮细胞分为阴性对照沉默组（si-CTL组）、沉默USP46组（si-USP46组）、阴性对照沉默+H/R处理组（si-CTL+H/R组）和沉默USP46+H/R处理组（si-USP46+H/R组）。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况，实时定量聚合酶链反应检测各组USP46、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素（IL）-18、IL-1β信使RNA(mRNA)表达，蛋白质印迹法检测各组USP46、NLRP3、GSDMD、裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（C-Caspase）-1蛋白表达。检测各组细胞上清中炎症因子和乳酸脱氢酶（LDH）表达情况，检测各组细胞活性氧簇（ROS）和丙二醛（MDA）水平。采用免疫共沉淀验证USP46和NLRP3的蛋白结合情况。结果 与si-CTL组比较，si-CTL+H/R组细胞凋亡水平升高，USP46、NLRP3、GSDMD-N、C-Caspase-1蛋白表达水平升高，USP46、NLRP3、GSDMD、IL-18、IL-1β mRNA表达水平升高，IL-18、IL-1β、TNF-α、LDH水平升高，ROS、MDA增多（均为P<0.05）；与si-CTL+H/R组相比，si-USP46+H/R组细胞凋亡水平降低，USP46、NLRP3、GSDMD-N、C-Caspase-1蛋白表达水平降低，USP46、GSDMD、IL-18 mRNA表达水平降低，IL-18、IL-1β、TNF-α、LDH水平降低，ROS、MDA水平降低（均为P<0.05）。免疫共沉淀结果显示USP46能够和NLRP3结合。结论 下调USP46能够减轻H/R诱导的肾小管上皮细胞焦亡，其机制可能是通过抑制USP46依赖性的NLRP3蛋白去泛素化水平，促进NLRP3泛素化降解。

关键词

肾移植 / 缺血-再灌注损伤 / 细胞焦亡 / 泛素化特异性蛋白酶46 / NOD样受体蛋白3 / 炎症小体 / 去泛素化 / 氧化应激