基因修饰供体猪肾脏获取、灌注、保存和运输方法的建立

摘要

目的 建立基因修饰供体猪肾脏获取、灌注、保存和运输的方法。方法 以8基因修饰猪为实验动物，肾脏获取前通过血液学检查猪的健康状况，影像学检查肾脏血管结构。肾脏获取后对猪肾脏进行灌注，将猪肾打包后放入粘贴“器官运输专用”标识的低温保存箱中，与运输部门沟通运输流程后跨省运输。采用苏木素-伊红（HE）染色、实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）荧光染色和酶联免疫吸附试验（ELISA）评估猪肾病理损伤情况。结果 术前检查8基因修饰猪的血清肌酐73.2μmol/L、血尿素氮2.8 mmol/L、血红蛋白116 g/L，均在正常范围内，提示肾功能正常；CT造影显示猪肾脏无病变，血管无扩张、狭窄或过早分支的情况；从8基因修饰猪获取左、右肾时间共计（125±10）min，出血量为（20±2）mL，热缺血时间分别为3 min和7 min；左、右肾灌注修整时间分别为36 min和41 min，灌注后双肾色白质润；冷保存运输时间为8 h,HE染色结果显示肾脏保存至8 h时部分肾小球发生皱缩，周围肾小管管腔向内轻微凹陷肿胀并有部分内膜脱落，有微小空泡形成；肾脏组织中半胱氨酸天冬氨酸酶3信使RNA水平在冷保存2 h后随时间延长逐渐升高（P<0.05）;TUNEL荧光染色显示冷保存至8 h仅有少量细胞凋亡，这与0 h相比无差异（P>0.05）。ELISA结果显示保存液乳酸脱氢酶（LDH）和肌酐含量保持相对稳定，但肾损伤分子1(KIM-1)含量随保存时间延长逐渐升高，提示猪肾脏有轻微损伤。结论 通过建立基因修饰供体猪的肾脏获取、灌注、保存和运输方法，可有效可靠地将基因修饰猪肾脏用于异种肾脏移植。

关键词

肾脏 / 异种移植 / 基因修饰猪 / 获取 / 灌注 / 保存 / 运输 / 半胱氨酸天冬氨酸酶3