Stattic通过调控记忆性CD4⁺T细胞介导的急性排斥反应对小鼠同种异体心脏移植物存活的影响

摘要

目的 探讨信号转导和转录激活因子3（STAT3）抑制剂Stattic对小鼠同种异体心脏移植排斥反应的影响及机制。方法 将BALB/c小鼠（供体）皮肤移植至C57BL/6小鼠（受体），4周后取受体小鼠脾脏分离获得记忆性CD4⁺T细胞（CD4⁺Tm）。将C57BL/6小鼠脾脏淋巴细胞与CD4⁺Tm进行混合淋巴细胞反应实验，EdU法检测Stattic对CD4⁺Tm细胞增殖的影响。构建C57BL/6小鼠心脏移植（HTx）模型，实验分为：NonHTx组、HTx组、Tm/HTx组和Tm/HTx+Stattic组。每日观察小鼠移植心脏存活情况；苏木素-伊红染色观察移植心脏组织病理情况；实时荧光定量聚合酶链反应检测心脏移植组织中干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-2、IL-10和转化生长因子-β1（TGF-β1）信使RNA（mRNA）表达水平；酶联免疫吸附试验检测血清IFN-γ、IL-2、IL-10和TGF-β1含量；流式细胞术检测脾脏淋巴细胞中CD4⁺Tm（CD4⁺CD44⁺CD62L⁺）水平；蛋白质印迹法检测移植心脏组织中STAT3和p-STAT3蛋白表达水平。结果 当Stattic浓度超过2.5μmol/L时，可抑制CD4⁺Tm细胞增殖。与HTx组比较，Tm/HTx组小鼠心脏移植物存活时间缩短，心脏移植组织病理损伤加重，血清IFN-γ和IL-2含量升高，IL-10和TGF-β1含量降低，移植心脏组织IFN-γ、IL-2 mRNA相对表达量升高，IL-10和TGF-β1 mRNA相对表达量降低，脾脏淋巴细胞中CD4⁺Tm比例升高，移植心脏组织p-STAT3/STAT3比值升高（均为P<0.05）。与Tm/HTx组比较，Tm/HTx+Stattic组小鼠心脏移植物存活时间延长，心脏移植组织病理损伤减轻，血清中IFN-γ、IL-2含量降低，IL-10和TGF-β1含量升高，移植心脏组织中IFN-γ、IL-2 mRNA相对表达量降低，IL-10、TGF-β1 mRNA相对表达量升高，脾脏淋巴细胞中CD4⁺Tm比例降低，移植心脏组织pSTAT3/STAT3比值降低（均为P<0.05）。结论 Stattic可延长小鼠同种异体心脏移植物的存活时间，其机制可能与抑制CD4⁺Tm介导的急性排斥反应有关。

关键词

心脏移植 / 排斥反应 / 信号转导和转录激活因子3 / Stattic / 记忆性CD4⁺T细胞 / 白细胞介素 / 干扰素 / 转化生长因子