下调XBP1s通过抑制ITPR介导的线粒体功能障碍改善肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤

摘要

目的 探讨剪接型X盒结合蛋白1(XBP1s)对小鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的影响及其作用机制。方法 将小鼠肾小管上皮细胞分为腺病毒阴性对照组（Ad-shNC组）、靶向沉默XBP1s腺病毒组（Ad-shXBP1s组）、Ad-shNC+H/R组、Ad-shXBP1s+H/R组。检测各组细胞凋亡水平、线粒体活性氧活性、线粒体膜电位及线粒体钙离子水平。使用染色质免疫共沉淀测序（ChIP-seq）分析XBP1s调控肌醇1,4,5-三磷酸受体（ITPR）家族的结合位点。检测各组XBP1s和ITPR家族信使RNA(mRNA)和蛋白表达水平。结果 与AdshNC组比较，Ad-shNC+H/R组细胞凋亡水平更高，线粒体活性氧水平升高，线粒体膜电位降低，线粒体钙离子水平升高；与Ad-shNC+H/R组比较，Ad-shXBP1s+H/R组细胞凋亡水平较低，线粒体活性氧水平下降，线粒体膜电位升高，线粒体钙离子水平降低（均为P<0.05）。与Ad-shNC组比较，Ad-shXBP1s组XBP1s、ITPR1、ITPR2和ITPR3 mRNA和蛋白相对表达量降低（均为P<0.05）。与Ad-shNC组相比，Ad-shNC+H/R组XBP1s、ITPR1、ITPR2和ITPR3蛋白相对表达量升高；与Ad-shNC+H/R组相比，Ad-shXBP1s+H/R组XBP1s、ITPR1、ITPR2和ITPR3蛋白相对表达量下降（均为P<0.05）。ChIP-seq结果显示，XBP1s能够结合ITPR1的启动子和外显子、ITPR2外显子和ITPR3外显子。结论 XBP1s可能通过直接调控ITPR转录和翻译而影响线粒体相关的内质网膜结构功能，下调XBP1s能够抑制ITPR表达，改善线粒体损伤。

关键词

器官移植 / 缺血-再灌注损伤 / 剪接型X盒结合蛋白1 / 肌醇1,4,5-三磷酸受体 / 线粒体损伤 / 内质网应激 / 线粒体相关的内质网膜 / 钙超载