下调XBP1s通过Sirt3/SOD2/mtROS轴减轻缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞衰老

摘要

目的 探讨剪接型X-盒结合蛋白1(XBP1s)在缺氧/复氧（H/R）诱导的原代肾小管上皮细胞衰老中的作用及机制。方法 将原代肾小管上皮细胞分为空白对照组（NC组）、H/R组、空载腺病毒阴性对照组（Ad-shNC组）、靶向沉默XBP1s腺病毒组（Ad-shXBP1s组）、空载腺病毒+H/R处理组（Ad-shNC+H/R组）、靶向沉默XBP1s腺病毒+H/R处理组（Ad-shXBP1s+H/R组）。检测NC组、H/R组、Ad-shNC组、Ad-shXBP1s组XBP1s的表达情况。检测Ad-shNC组、Ad-shNC+H/R组、Ad-shXBP1s+H/R组β-半乳糖苷酶染色情况，细胞衰老标志物p53、p21、γH2AX表达情况，氧化应激相关指标活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。采用染色质免疫共沉淀验证XBP1s转录调控沉默信息调节因子3(Sirt3)，检测下调XBP1s后Sirt3及下游SOD2表达，采用流式细胞术检测线粒体活性氧簇（mt ROS）。结果 与NC组比较，H/R组XBP1s表达增多；与Ad-sh NC组比较，Ad-sh XBP1s组XBP1s表达减少（均为P<0.001）。与Adsh NC组比较，Ad-sh NC+H/R组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加，p53、p21、γH2AX表达增多，ROS、MDA、mt ROS水平升高，SOD活性下降，Sirt3表达量降低，Ac-SOD2/SOD2比值升高；与Ad-sh NC+H/R组相比，Ad-sh XBP1s+H/R组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数减少，p53、p21、γH2AX表达减少，ROS、MDA、mt ROS水平下降，SOD活性升高，Sirt3表达量升高，Ac-SOD2/SOD2比值下降（均为P<0.05）。结论 下调XBP1s可减轻H/R诱导的原代肾小管上皮细胞衰老，可能是通过Sirt3/SOD2/mt ROS信号轴发挥作用。

关键词

肾移植 / 缺血-再灌注损伤 / 剪接型X盒结合蛋白1 / 细胞衰老 / 氧化应激 / 沉默信息调节因子3 / 线粒体活性氧簇 / 超氧化物歧化酶

基金资助

国家自然科学基金（82170772、82370759）; 湖北陈孝平科技发展基金会青年科学专项基金（CXPJJH122001-2210）