转基因猪骨髓间充质干细胞的分离及与猪胰岛的共培养研究

摘要

目的 探讨α-1, 3-半乳糖基转移酶（GGTA1）基因敲除（GTKO）、GTKO/人补体调节蛋白hCD46插入、单磷酸胞嘧啶-N-乙酰神经氨酸羟化酶（CMAH）/GGTA1双基因敲除（Neu5GC/Gal）猪骨髓间充质干细胞（BMSC）的分离培养，以及与猪胰岛共培养对胰岛的保护作用。方法 从不同转基因修饰GTKO、GTKO/hCD46及Neu5GC/Gal猪中提取骨髓，采用全骨髓法分离猪BMSC后进行培养。对BMSC进行形态学观察，并使用流式细胞术鉴定BMSC表面标志物。同时，观察BMSC诱导的多向分化，通过绿色荧光蛋白（GFP）转染标记猪BMSC来实现对BMSC的标记和示踪。将GFP转染标记的猪BMSC与猪胰岛细胞共培养，观察猪胰岛形态变化，与单纯猪胰岛细胞培养组进行比较。结果 猪来源的BMSC在体外培养时呈梭形，表达标志物CD29、CD44、CD73、CD90、CD105及CD166，不表达CD34、CD45，具有向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的能力；通过GFP转染标记的猪BMSC能够实现BMSC的标记和示踪，且在细胞分裂后的子代细胞中也能够稳定表达。猪BMSC对胰岛细胞有一定保护能力。结论 成功建立了GFP标记的GTKO、GTKO/hCD46及Neu5GC/Gal猪来源的BMSC，其对胰岛细胞具有一定的保护能力。

关键词

胰岛移植 / 1型糖尿病 / 间充质干细胞 / 基因修饰猪 / 分离 / 鉴定 / 共培养 / 排斥反应