SPP1⁺巨噬细胞在慢性移植肾纤维化形成中的作用及机制研究

摘要

目的 探讨分泌型磷蛋白1(SPP1)+巨噬细胞在慢性移植肾纤维化形成中的作用及可能机制。方法 基于慢性移植肾失功（CAD）患者肾组织的单细胞转录组数据分析SPP1+巨噬细胞在CAD患者移植肾中的表达特征。对单细胞转录组数据结果进行转录因子VIPER分析以及DoRothEA转录因子活性分析。收集肾移植受者肾脏组织样本，包括CAD组（n=5）和未发生移植肾纤维化组（CTL组，n=5）。建立同种异体小鼠移植肾慢性排斥反应模型，分为同种异体肾移植组（CAD组，n=3）和同品系肾移植组（SYN组，n=3）。苏木素-伊红染色检测小鼠肾组织损伤情况，Masson染色检测小鼠肾组织纤维化。免疫荧光染色检测肾移植受者及小鼠移植肾组织中SPP1表达。提取小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）进行缺氧刺激，采用蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子（HIF）-1α和SPP1表达，流式细胞术检测SPP1表达。将HIF-1α过表达质粒和HIF-1α小干扰RNA(siRNA)转染至BMDM后进行缺氧干预，蛋白质印迹法检测HIF-1α和SPP1表达。将小鼠主动脉内皮细胞（MAEC）与BMDM上清液进行共培养，蛋白质印迹法和免疫荧光检测共培养后内皮-间充质转化（EndMT）相关指标表达。结果 单细胞转录组数据分析结果显示，CAD组移植肾组织SPP1+巨噬细胞比例高于CTL组（P<0.05）。CAD组小鼠肾损伤评分高于SYN组，间质纤维区域占比大于SYN组（均为P<0.05）。免疫荧光染色结果显示，与CTL组相比，CAD组SPP1+巨噬细胞比例升高；与SYN组相比，CAD组SPP1+巨噬细胞比例升高（均为P<0.05）。转录因子VIPER分析以及DoRothEA转录因子活性分析结果显示，SPP1+巨噬细胞中缺氧通路激活，HIF-1α等转录因子表达升高。在缺氧条件下，BMDM中SPP1表达水平升高。敲低HIF-1α可抑制缺氧诱导的SPP1蛋白表达；而过表达HIF-1α可上调SPP1蛋白表达水平。缺氧诱导的BMDM与MAEC共培养后，EndMT相关指标表达水平升高。结论 缺氧诱导分化的SPP1+巨噬细胞在慢性移植肾纤维化形成中显著浸润，可能通过诱导肾血管内皮细胞发生EndMT过程促进移植肾纤维化形成。

关键词

肾移植 / 纤维化 / 分泌型磷蛋白1 / 巨噬细胞 / 缺氧诱导因子-1α / 内皮-间充质转化 / 内皮细胞 / 慢性移植肾失功

基金资助

国家自然科学基金（82470790、82170769）