高迁移率族蛋白B1通过巨噬细胞促进口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭的机制研究

摘要

目的 探究巨噬细胞M2型丙酮酸激酶(PKM2)在高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)诱导的口腔鳞状细胞癌(OSCC)迁移和侵袭中的作用，阐明HMGB1通过巨噬细胞促进OSCC迁移和侵袭的分子机制。方法 采用佛波酯刺激人单核细胞白血病THP-1细胞成为M0巨噬细胞，在HMGB1的刺激下采用PKM2抑制剂进行干预，对得到的M0巨噬细胞进行分组处理，根据是否抑制PKM2分为对照组和PKM2抑制剂组，对照组在CAL27肿瘤条件培养基中加入人源重组HMGB1(rhHMGB1),PKM2抑制剂组在CAL27肿瘤条件培养基中加入rhHMGB1和PKM2抑制剂。采用Transwell共培养体系检测两组CAL27细胞迁移和侵袭能力，流式细胞术和细胞免疫荧光检测各组细胞中M1型巨噬细胞标志物CD86以及M2型巨噬细胞标志物CD206的阳性率，采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和M2型巨噬细胞标志物精氨酸酶1(Arg-1)、转化生长因子-β(TGF-β)的基因表达水平。结果 Transwell结果显示，与对照组比较，PKM2抑制剂组的CAL27细胞迁移和侵袭细胞数量显著低于对照组(P<0.001)。流式细胞术和细胞免疫荧光实验结果显示，与对照组比较，PKM2抑制剂组的M1型巨噬细胞特异性标志物CD86的表达水平呈现出显著的降低趋势(P<0.01),而M2型巨噬细胞特异性标志物CD206的表达则呈现上调趋势(P<0.05)。qRT-PCR的实验数据表明，与对照组比较，PKM2抑制剂组的M1型巨噬细胞标志物iNOS的mRNA水平显著降低(P<0.01),TNF-α的mRNA水平显著降低(P<0.001),而M2型巨噬细胞标志物Arg-1和TGF-β的基因水平均显著上调(P<0.01)。结论 HMGB1通过PKM2诱导肿瘤相关巨噬细胞M1型极化，促进OSCC的迁移和侵袭。

关键词

口腔鳞状细胞癌 / 迁移和侵袭 / 肿瘤相关巨噬细胞 / PKM2 / 极化