紫外线A诱导的人真皮成纤维细胞光老化及小鼠皮肤光老化模型的构建与评价

摘要

目的 建立紫外线A（UVA）诱导的人真皮成纤维细胞（HDFs）光老化和小鼠皮肤光老化模型，为探究皮肤光老化机制及防治皮肤光老化提供良好的模型。方法 利用酶消化法分离获得HDFs,并检测其表面标志物。采用UVA照射HDFs（剂量5 J/cm²,15 min/d,连续3 d）构建体外HDFs光老化模型。将12只雌性昆明小鼠分为对照组（Control组）和模型组（UVA照射组）,每组6只。采用UVA照射小鼠（剂量20 J/cm²,1 h/d, 5次/周，连续8周）,构建小鼠皮肤光老化模型。通过观察细胞形态、检测其增殖能力和衰老相关β-半乳糖苷酶活性，小鼠背部皮肤的大体观察，皮肤组织苏木素-伊红和Masson染色，实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测衰老相关因子P16^INK4a和P21的mRNA表达，以及Western blot和免疫组织化学染色检测皮肤老化相关蛋白Ⅰ型胶原蛋白（Collagen-Ⅰ）和基质金属蛋白酶1（MMP1）的表达，对模型进行评价。结果 HDFs呈长梭形，表达波形蛋白而不表达E钙黏蛋白。UVA照射后HDFs体积变大、呈铺展状，其增殖能力减弱，衰老细胞阳性率及P16^INK4a和P21的mRNA表达水平增高，Collagen-Ⅰ表达下调，而MMP1表达上调。与Control组比较，UVA照射组小鼠的背部皮肤粗糙，可见色素沉着，其表皮增厚，真皮变薄，胶原沉积减少，胶原纤维排列紊乱，且P16^INK4a和P21的mRNA表达水平显著增高，Collagen-Ⅰ表达降低，而MMP1表达升高。结论 成功建立了UVA照射所致的HDFs光老化模型和小鼠皮肤光老化模型，为探究皮肤光老化的机制以及开发光老化防治策略提供了实验基础。

关键词

皮肤光老化 / 紫外线A / 成纤维细胞 / 动物模型 / 评价