人乳头瘤病毒16和18型的E6和E7蛋白多克隆抗体制备及鉴定

摘要

目的：预测人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）16型和18型的E6及E7蛋白的B细胞线性表位，制备兔抗HPV16和HPV18的E6和E7的多克隆抗体。方法：利用生物信息学软件分析HPV16和HPV18的E6和E7蛋白的氨基酸序列，预测B细胞线性表位，设计并人工合成HPV16 E6、HPV16 E7、HPV18 E6及HPV18 E7多肽，将合成肽分别与血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin,KLH）偶联，免疫新西兰大白兔，制备HPV16和HPV18的E6和E7多克隆抗体。以原核系统表达的重组蛋白Flic-HPV16 E6 E7、Flic-HPV18 E6 E7为检测抗原，采用间接ELISA法和Western blot法检测多克隆抗体的效价和特异性。结果：ELISA法检测所制备的HPV16 E6、HPV16 E7和HPV18 E7多克隆抗体的效价可达1:2.56×10～5,HPV18 E6多克隆抗体效价可达1:1.28×10～5。Western blot结果显示，所制备的抗体均能与相应的重组蛋白Flic-HPV16 E6E7和Flic-HPV18 E6E7特异性结合。结论：采用人工合成肽作为免疫原成功制备了高效价、特异性好的兔抗HPV16和HPV18的E6和E7蛋白多克隆抗体，为后续进行HPV感染检测、疫苗研发等实验研究创造了条件。

关键词

人乳头瘤病毒 / 多克隆抗体 / E6蛋白 / E7蛋白