抗牛A群轮状病毒VP7蛋白单链抗体原核表达及活性鉴定

摘要

旨在制备靶向牛A群轮状病毒（Group A Bovine Rotavirus, BRVA）VP7蛋白的单链抗体（single-chain fragment variable, scFv）.以项目组前期实验制备的BRVA VP7蛋白鼠源单克隆抗体C8杂交瘤细胞为模板，通过高通量测序获得其抗体可变区（variable region, V区）基因序列，并使用（Gly₄Ser）^×3作为linker构建scFv基因片段，并将其克隆至pET28a（+）载体，转化至大肠杆菌BL21（DE3）中表达.结果显示，C8-scFv在大肠杆菌BL21（DE3）中以包涵体形式表达，其相对分子质量约为26 kDa.免疫荧光试验结果表明，C8-scFv能够特异性识别BRVA,具有良好的反应活性.研究成功制备了靶向BRVA VP7蛋白的scFv,为开发基于免疫学的BRVA检测技术奠定了基础.

关键词

牛A群轮状病毒 / 单链抗体 / VP7蛋白 / 单克隆抗体 / 原核表达 / 活性鉴定