A型口蹄疫病毒抗体化学发光免疫竞争分析法的建立与初步应用

摘要

为提高A型FMDV抗体检测的敏感性和特异性，简化反应步骤，缩短反应时间，以兔抗A型FMDV抗体作为捕获抗体，A型FMDV 146S作为包被抗原，A型特异性的单克隆抗体作为竞争抗体，鲁米诺作为化学发光底物，结合化学发光免疫分析法技术，建立一种高特异性、高灵敏性、准确快速、操作简便的A型FMDV抗体cCLIA检测方法.结果显示，最佳兔抗A型FMDV抗体包被稀释度为1∶1 000,最佳抗原浓度为1μg/mL,最佳稀释液为2%BSA-PBST,血清最佳稀释度为1∶10,酶标单抗BC2B7-HRP最佳浓度为0.1μg/mL,待检血清和酶标单抗最佳作用时间为37℃下孵育30 min,其批内变异系数0.5%～17.4%之间，批间变异系数在0.4%～7.9%之间，具有良好的重复性.通过对175份临床血清的检测，该方法与液相阻断ELISA试剂盒相比，其相对敏感性为102.3%,特异性为100%.结果表明，建立的A型FMDV抗体cCLIA特异性和灵敏性高，且能在1.5 h完成检测，成功建立了一种快速检测A型口蹄疫病毒抗体的化学发光免疫竞争分析法(A型FMDV抗体cCLIA),为口蹄疫的有效防控提供了新的技术.

关键词

A型口蹄疫病毒 / 化学发光免疫竞争分析法 / 抗体检测方法

基金资助

四川省自然科学基金项目(2024NSFSC1274); 中央高校基本科研业务费专项资金优秀学生培养工程项目(2023NYXXS111); 西南民族大学引进高层次人才科研资助金项目(RQD202100)