牦牛INSL3基因生物信息学及睾丸组织表达分析

摘要

旨在探究牦牛INSL3基因的序列特征及组织表达模式，为解析其在雄性生殖中的功能机制提供理论依据.通过RT-PCR技术扩增牦牛INSL3基因CDS区序列，并对其进行生物信息学分析.利用实时荧光定量PCR技术，检测INSL3在牦牛心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉和睾丸中的mRNA表达水平.利用免疫组织化学技术分析INSL3蛋白的细胞定位和表达情况.结果显示，牦牛INSL3基因CDS区全长399 bp,共编码132个氨基酸；系统进化树分析结果表明牦牛与黄牛的亲缘关系最近，与狒狒最远；生物信息学分析表明牦牛INSL3蛋白存在信号肽序列及跨膜结构域，属于亲水蛋白，主要存在于细胞外，且该蛋白含有胰岛素样生长因子(ILGF)结构域，具有7个磷酸化位点；该蛋白预测二级结构主要由α-螺旋(38.85%)和无规卷曲(52.27%)组成；RT-qPCR结果显示，INSL3在牦牛睾丸中表达最高，极显著高于其他组织(P<0.01);免疫组织化学染色显示，INSL3蛋白主要在睾丸间质细胞表达，在精原细胞以及支持细胞有少量表达.综上，研究成功扩增了牦牛INSL3基因，并获得其序列特征及组织表达模式，为进一步探究INSL3基因在雄性牦牛生殖功能中的作用机制提供理论参考.

关键词

牦牛 / INSL3基因 / 生物信息学分析 / 组织表达