基于P53/ALOX12轴探讨健脾化浊调脂方对人脐静脉内皮细胞铁死亡的影响

摘要

目的 探讨健脾化浊调脂方（JHTR）通过P53/ALOX12轴对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）铁死亡的影响及机制。方法 体外培养HUVECs，采用100 mg·L^-1氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞损伤模型，将细胞随机分为6组：空白对照组（CON组）、模型组（MOD组）、1.8 mg·kg^-1阿托伐他汀阳性药组（Ator组）及7.92、15.84、31.68 g·kg^-1JHTR低、中、高剂量含药血清干预组（JHTR-L、JHTR-M、JHTR-H组）。干预24 h后，采用CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，比色法检测亚铁离子(Fe²⁺)、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平，免疫荧光检测活性氧（ROS），采用RT-PCR、Western blot分别检测P53、SLC7A11、ALOX12 mRNA及蛋白表达水平。结果 成功筛选出100 mg·L^-1为ox-LDL最佳造模浓度、15%为JHTR含药血清最佳干预浓度。与CON组比较，MOD组HUVECs活力降至（46.5±6.4）%（P<0.01），凋亡率升高71.1%；铁死亡核心指标呈典型异常改变：Fe²⁺、MDA、ROS水平分别升高88.2%、69.9%、331.9%,GSH水平降低40.8%,P53、ALOX12 mRNA及蛋白表达显著上调，SLC7A11表达显著下调（均P<0.01）。与MOD组比较，JHTR各剂量组上述指标呈剂量依赖性改善：其中MDA、ROS、GSH及调控分子表达在各剂量组差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01），而Fe²⁺水平仅在JHTR-M、JHTR-H组降低（P<0.05或P<0.01）,JHTR-H组整体干预效果与阿托伐他汀阳性药组相当（P>0.05）。结论 JHTR可通过下调P53/ALOX12轴的过度激活，抑制HUVECs铁死亡，减少氧化应激，抑制ox-LDL诱导的HUVECs细胞凋亡。

关键词

健脾化浊调脂方 / 人脐静脉内皮细胞 / 铁死亡 / 氧化应激 / P53/ALOX12信号通路 / 动脉粥样硬化

基金资助

国家中医药管理局全国名老中医药专家龚子夫传承工作室项目（国中医药人教函[2022]75号）; 江西省自然科学基金资助项目（20232BAB216109）; 江西省卫健委科技计划项目（202310534）; 江西省中医药管理局科技计划项目（2022A343）