藏红花素通过AMPK-mTOR自噬通路抑制冻结肩纤维化的分子机制

摘要

目的 基于腺苷酸激活蛋白激酶-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（AMPK-mTOR）自噬通路探究藏红花素对冻结肩（adhesive capsulitis,AC）大鼠的作用及其分子机制。方法 将40只大鼠随机分为对照组（C组）、模型组（M组）、藏红花素处理组（A组）、藏红花素+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）处理组（B组），每组10只。将M组、A组、B组大鼠采用持续机械劳损联合冰敷方法建立AC模型；A组大鼠给予20 mg·kg-1藏红花素腹腔注射，B组大鼠给予20 mg·kg-1藏红花素、30 mg·kg-1 3-MA腹腔注射，其余2组大鼠给予相同体积的生理盐水腹腔注射，1次·d-1，共给药3周。评估各组大鼠肩关节活动状况；采用HE和Masson染色观察肩关节囊组织病理及纤维化变化；采用免疫组织化学法检测肩关节囊组织转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平；采用透射电镜观察肩关节囊组织细胞自噬情况；采用Western blot检测肩关节囊组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、AMPK、mTOR、结节性硬化复合物蛋白2(TSC2)、自噬相关蛋白1(ULK1)表达水平。结果 与C组比较：M组大鼠运动能力显著下降（P<0.05）；肩关节囊组织呈纤维化病理；肩关节囊组织中TGF-β1、α-SMA、mTOR、ULK1蛋白表达水平显著升高，自噬体数量及Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、AMPK、TSC2蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与M组比较：A组大鼠运动能力显著提高（P<0.05）；肩关节囊组织纤维化病理明显减轻；肩关节囊组织中TGF-β1、α-SMA、mTOR、ULK1蛋白表达水平显著降低，自噬体数量及Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、AMPK、TSC2蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。3-MA自噬抑制剂能逆转藏红花素对AC大鼠肩关节囊组织的改善作用及AMPK-mTOR自噬通路蛋白的变化（P<0.05）。结论 藏红花素可能通过激活AMPK-mTOR自噬通路抑制AC大鼠肩关节囊纤维化。

关键词

冻结肩 / 藏红花素 / 自噬 / 纤维化 / AMPK-mTOR通路 / 实验,动物 / 大鼠