CHMP4A真核表达载体的构建及其对肾透明细胞癌的影响

摘要

背景 肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)的靶向治疗可显著改善晚期ccRCC患者的预后，寻找新的治疗靶标可为开发新型治疗药物提供依据。目的 构建真核表达载体pcDNA3.0-Flag-CHMP4A。在体外细胞实验中检测CHMP4A对ccRCC 786-O细胞增殖和迁移的影响，分析CHMP4A在ccRCC中的表达及对ccRCC患者预后的影响。方法 利用PCR技术从乳腺文库中扩增目的基因CHMP4A，通过同源重组将CHMP4A与载体pcDNA3.0连接。786-O细胞转染pcDNA3.0-Flag-CHMP4A后，Western blot方法检测CHMP4A的蛋白表达，CCK-8、克隆形成及划痕实验检测CHMP4A对786-O细胞增殖和侵袭的影响。检索TCGA数据库中ccRCC转录组数据，分析CHMP4A在肿瘤不同分期、分级和淋巴细胞转移组中的表达，应用Kaplan-Meier法分析CHMP4A表达与ccRCC预后的关系。结果 成功构建了pcDNA3.0-Flag-CHMP4A真核表达载体，并在786-O细胞中成功表达，体外实验发现Flag-CHMP4A可抑制ccRCC 786-O细胞的增殖和迁移(P<0.05);TCGA数据库显示，CHMP4A是mRNA表达水平与ccRCC患者的分期、分级及淋巴结转移强相关(P<0.01)。CHMP4A高表达组有较长的无病生存期和总生存期(P<0.01)。结论 CHMP4A在抑制肿瘤细胞增殖和迁移中发挥了重要作用，其表达与ccRCC患者的预后呈正相关。本研究为ccRCC的治疗提供了潜在靶标。

关键词

靶向治疗 / 肾透明细胞癌 / 真核表达 / TCGA / 预后