人原代单核细胞经地塞米松刺激后的吞噬功能及转录组变化研究

摘要

背景 噬血淋巴组织细胞增多症(hemophagocytic lymphohistiocytosis,HLH)是由于多种原因导致的过度的全身性炎症反应和器官功能障碍，高剂量的地塞米松常用于抑制炎症，血清可溶性VSIG4 (sVSIG4)可作为评估巨噬细胞活化的标志物用于诊断HLH。目的 探究地塞米松刺激人原代单核细胞高表达VSIG4后的吞噬功能及基因转录表达变化，并筛选关键表达基因和通路。方法 体外分离人外周血单个核细胞，使用磁珠分选法阳选出CD14+单核细胞，加入地塞米松刺激，使用qPCR、流式细胞术和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测VSIG4的表达，并用Western blot检测细胞培养上清中sVSIG4的表达，在地塞米松刺激VSIG4表达的同时检测单核细胞吞噬功能；利用RNA-seq对地塞米松刺激前后的人原代单核细胞差异基因进行测序，并进行KEGG通路富集和蛋白质互作分析，通过节点分析找到hub基因和关键信号通路。结果 体外地塞米松刺激单核细胞在mRNA和蛋白水平促进VSIG4表达上调(P<0.01)，具有剂量依赖性和时间依赖性；地塞米松刺激的单核细胞过表达VSIG4会发生胞外段剪切生成sVSIG4；地塞米松刺激的VSIG4+单核细胞吞噬作用增强(P<0.01)。RNA-seq差异分析中，共有491个差异表达基因，其中上调159个，下调332个；KEGG通路富集显示差异基因主要集中在EB病毒感染、新冠病毒感染、补体和凝血级联反应、NOD样受体信号通路、嘧啶代谢、C型凝集素受体信号通路、吞噬小体、金黄色葡萄球菌感染、Ⅰ型糖尿病、RIG-Ⅰ样受体信号通路、Toll样受体信号通路等信号通路(P<0.05)；从PPI网络确定了20个hub基因。结论 体外地塞米松刺激人原代单核细胞可以促进VSIG4表达上调，同时生成sVSIG4,VSIG4+单核细胞可能具有更强的吞噬功能。转录组分析提示部分炎症相关基因和信号通路可能与VSIG4的表达调控和噬血淋巴组织细胞增多症的发病机制有关。

关键词

地塞米松 / VSIG4 / 单核细胞 / 转录组测序 / 吞噬

基金资助

国家自然科学基金项目(82170230)