骨桥蛋白促进腹膜透析相关腹膜纤维化的作用研究

摘要

背景 腹膜纤维化是腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)超滤衰竭最常见的原因，骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在很多器官中起促纤维化作用，但其在腹膜透析相关腹膜纤维化中的作用尚未被证实。目的 探究骨桥蛋白促进腹膜透析相关腹膜纤维化的作用。方法 体外分别使用1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL的骨桥蛋白刺激人腹膜间皮细胞，观察间皮细胞形态。体外培养小鼠巨噬细胞，0.5μg/mL脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激，检测骨桥蛋白的表达。对3种siRNA序列进行筛选，用筛选得到的序列合成体内用siRNA。将20只小鼠随机分为0.9%氯化钠注射液对照组、腹膜透析对照组、siRNA载体对照组和siRNA实验组，每组5只。造模方式：0.9%氯化钠注射液对照组，小鼠腹腔注射100 mL/kg 0.9%氯化钠注射液，1次/d；腹膜透析对照组，小鼠腹腔注射100 mL/kg含有4.25%葡萄糖的腹膜透析液，1次/d;siRNA载体对照组和siRNA实验组，在进行每日100 mL/kg含有4.25%葡萄糖的腹膜透析液注射的同时，将5 nmol体内用siRNA空载体或5 nmol体内用siRNA溶解至腹膜透析液中进行腹腔注射，1次/3 d；所有动物模型均造模4周。取小鼠右侧壁腹膜组织，通过病理切片测量壁腹膜厚度、间皮下胶原纤维面积和微血管数量，Western blot检测α-SMA和E-钙黏蛋白表达量，免疫组化进行α-SAM染色，评估腹膜纤维化程度。结果 添加外源性骨桥蛋白刺激后，人腹膜间皮细胞排列杂乱，细胞形状变细长，向外延伸出角状，呈间充质样改变。LPS刺激的巨噬细胞中骨桥蛋白表达增加(P<0.05)。siRNA转染后抑制骨桥蛋白表达，其中si-002添加后骨桥蛋白减少更显著(P<0.05)。在腹膜透析对照组中，使用CD68、骨桥蛋白进行免疫荧光共染色，证实骨桥蛋白在巨噬细胞中表达。与腹膜透析对照组相比，siRNA实验组壁腹膜间皮下厚度减小(P<0.05)，间皮下微血管数量减少(P<0.05)，胶原蛋白沉积面积减小(P<0.05)，壁腹膜组织中α-SMA表达减少，E-钙黏蛋白表达增加(P<0.05)。结论 抑制腹膜骨桥蛋白表达可以减缓腹膜透析相关腹膜纤维化。

关键词

腹膜透析 / 腹膜纤维化 / 骨桥蛋白 / 巨噬细胞 / 小干扰RNA