年轻化间充质干细胞条件培养基促进小鼠创面愈合的研究

摘要

背景 间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)条件培养基无细胞疗法是创伤修复领域的一种新型治疗方案，但其治疗效果受间充质干细胞状态的影响。目的 探究年轻化MSC培养基对小鼠创面愈合的作用。方法 建立间充质干细胞复制性衰老(传代至15～20代)模型，检测其衰老指征；使用小分子化合物[丙戊酸(valproic acid,VPA)和RepSox]逆转衰老间充质干细胞并验证逆衰老效果。分别收集衰老MSC培养基与年轻化MSC培养基。用收集到的两种条件培养基培养人成纤维细胞，使用CCK-8实验、Ki-67免疫荧光、划痕实验和Transwell实验检测这两种条件培养基对成纤维细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。分别用衰老MSC培养基、年轻化MSC培养基和0.9%氯化钠注射液治疗C57BL/6小鼠背部皮肤全层缺损模型，评估3种治疗方法对创面愈合的影响。结果 与衰老的间充质干细胞相比，经小分子处理后衰老间充质干细胞SA-β-gal阳性率降低(P<0.01)，且免疫荧光检测显示其衰老基因P21、P16表达降低(P<0.01)。经年轻化MSC培养基处理的成纤维细胞增殖、迁移和侵袭能力增强(P<0.01)。创伤模型显示，与对照组相比，年轻化MSC培养基治疗组小鼠创面愈合速度加快(P<0.01)；年轻化MSC培养基治疗组小鼠创面HE染色显示表皮细胞再上皮化加快(P<0.01)、Masson染色显示创面胶原沉积量增加(P<0.01)、CD31免疫荧光染色显示创面血管量增加(P<0.01)。结论 年轻化MSC培养基对小鼠创面修复或有促进作用。

关键词

间充质干细胞 / 条件培养基 / 小分子化合物 / 成纤维细胞 / 创面愈合