MYSM1对大鼠颌骨骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响

摘要

背景 去泛素化酶能够调控骨骼生长发育，MYSM1基因缺失会造成全身骨骼疏松，当前并无MYSM1对颌骨发育影响的研究。目的 探讨MYSM1对颌骨来源的骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法 分离10只8周Wistar大鼠下颌骨，利用组织消化法分离培养颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,JBMMSCs)。取生长良好的第3～5代JBMMSCs进行成骨诱导，利用qPCR、Western blot技术检测成骨标志物OCN、Runx2、ALP及去泛素化酶MYSM1的变化。分别利用空转染慢病毒和MYSM1敲低的慢病毒转染JBMMSCs，设置对照组和敲低组细胞，qPCR检测敲低效率。CCK-8、细胞克隆形成实验检测其敲低MYSM1对细胞的增殖能力影响，细胞划痕实验检测细胞迁移能力。空转染慢病毒和敲低MYSM1的JBMMSCs成骨诱导7 d后利用qPCR技术、ALP、茜素红染色检测成骨的表达变化。结果 JBMMSCs成骨诱导成功后，MYSM1的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。CCK-8显示对照组和敲低组的细胞增殖能力无统计学差异(P>0.05)，两组间细胞集落形成实验和细胞迁移能力有统计学差异(P<0.05)。敲低组JBMMSCs在成骨诱导7 d后OCN、Runx2、ALP的mRNA表达水平降低(P<0.05),ALP、茜素红染色浅于对照组。结论 敲低MYSM1并未对JBMMSs的增殖和迁移能力造成显著影响，而敲低MYSM1的JBMMSCs成骨分化能力降低。

关键词

去泛素化酶 / MYSM1 / 颌骨骨髓间充质干细胞 / 成骨分化 / 细胞增殖