低温缺氧-复氧心肌成纤维细胞源性外泌体对心肌细胞损伤的机制研究

摘要

背景低温缺氧-复氧大鼠心肌成纤维细胞（rat cardiac fibroblasts,RCF）对H9c2心肌细胞有损伤作用，其调控机制尚不明确。目的 观察低温缺氧-复氧RCF分泌的外泌体对H9c2心肌细胞及缝隙链接蛋白43 （connexin 43,Cx43）的影响。方法 分别提取并鉴定常氧（95%空气+5%CO₂,37℃条件下培养5 h）和低温缺氧-复氧（95%N₂+5%CO₂,4℃条件下培养1 h后，95%空气+5%CO₂,37℃条件下培养4 h）条件下RCF培养液中的外泌体，常氧和低温缺氧-复氧条件下提取的外泌体分别标记为N-exo和I/R-exo。采用随机数字表法将体外培养的大鼠H9c2心肌细胞分为C组（常规条件下培养12 h）、N组（与N-exo共孵育12 h）和I/R组（与I/R-exo共孵育12 h），共孵育结束后，收集心肌细胞，流式细胞术测定H9c2心肌细胞的凋亡率；Western blot检测心肌细胞Cx43和磷酸化Cx43 （p-Cx43）的表达；划痕实验检测心肌细胞的迁移能力。结果 C组与N组心肌细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）,C组和N组心肌细胞凋亡率均低于I/R组（P<0.05）；相较于C组，I/R组Cx43及P-Cx43表达下调、细胞迁移能力降低（P<0.05）,N组Cx43及P-Cx43表达上调、细胞迁移能力升高（P<0.05）。结论 低温缺氧-复氧心肌成纤维细胞释放的外泌体可增加心肌细胞的凋亡率，降低心肌细胞迁移能力，下调心肌细胞Cx43及P-Cx43的表达。

关键词

低温缺氧-复氧 / 成纤维细胞 / 心肌细胞 / 外泌体 / Cx43