miR-205-5p靶向ERBB3调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管生成在痔疮中的分子机制

摘要

目的 探讨miR-205-5p靶向ERBB3调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管生成在痔疮中的分子机制。方法 收集2021年07月至2022年06月临床12例患者的痔核和正常肛周组织，通过qRT-PCR检测临床病理样本中miR-205-5p和ERBB3的表达情况，双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p与ERBB3的靶向关系。将miR-205-5p mimic、pcDNA-ERBB3、miR-205-5p inhibitor、sh-ERBB3、oe-ERBB3及阴性对照质粒分别或共同转染至痔疮模型大鼠和HUVEC细胞。HE、TUNEL染色观察组织病理和细胞凋亡情况，免疫组化检测ERBB3、VEGFR2蛋白定位及表达水平，Western blot检测ERBB3、VEGFR2、Cyclin D1、Cleaved-caspase 3、Bax、Bcl-2和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。MTT、划痕愈合、Transwell实验、流式细胞术、血管形成实验检测各组HUVEC细胞增殖、迁移、侵袭能力、凋亡率和血管生成量。结果 痔疮临床样本中miR-205-5p呈低表达，ERBB3呈高表达（P <0.001）,miR-205-5p与ERBB3(WT)的3'UTR靶向结合（P <0.001）。miR-205-5p mimic组痔疮大鼠和HUVEC细胞中ERBB3表达量显著降低（P <0.01,P <0.001）,VEGFR2(P <0.001)、Cyclin D1(P <0.01)、Bcl-2(P <0.001)、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR(P <0.001)水平显著下调，Cleaved-caspase 3和Bax水平显著上调（P <0.01），大鼠肛周组织病理状况改善，HUVEC细胞增殖、迁移和侵袭力均降低（P <0.001），凋亡率升高（P <0.001），血管生成数量及分支减少（P <0.001）,pcDNAERBB3逆转了这一效应（P <0.001）。结论 miR-205-5p能通过靶向抑制ERBB3表达，下调PI3K/AKT/mTOR通路活性，抑制细胞增殖、迁移和侵袭，促进细胞凋亡，减少血管生成，从而缓解痔疮进展。

关键词

痔疮 / miR-205-5p / ERBB3 / PI3K/AKT/mTOR通路 / 血管生成