下调HPV16 E6/E7表达宫颈癌细胞Siha上清液代谢组学

摘要

目的 基于核磁共振氢谱（1H NMR）代谢组学筛选抑制HPV16 E6/E7表达，检测宫颈癌Siha细胞中差异代谢物以及相关通路，以明确感染高危型HPV16宫颈癌发生的关键代谢标志物。方法 通过RNAi片段转染Siha细胞下调E6/E7表达，分为正常对照组（Siha细胞）、空载组（si-NON）、si-E6组与si-E7组，并验证其转染效率。利用1H NMR代谢组学技术揭示干扰Siha细胞中E6/E7表达后所涉及的差异代谢物；结合MetaboAnalyst 5.0在线软件，得到改变的差异性代谢物和相关的代谢途径。结果 荧光倒置显微镜观察细胞荧光存在；Western blotting检测结果显示，与Siha组比较，si-E6组与si-E7组中E6/E7的表达量降低（F=145.8,P<0.001）；下调E6/E7表达后，检测13种共有差异代谢物，包括异亮氨酸（Isoleucine），亮氨酸（Leucine），缬氨酸（Valine）;MetaboAnalyst 5.0在线软件分析结果提示，以上代谢物主要涉及氨酰-tRNA生物化学合成途径；异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的生物化学合成途径；酪氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸的生物化学合成等10条代谢途径。结论 HPV16感染后通过改变葡萄糖及氨基酸相关代谢促进宫颈癌的进展，为宫颈癌的防治提供理论依据。

关键词

HPV16 E6/E7 / 宫颈癌 / 代谢组学