恶性胸膜间皮瘤细胞培养条件及CDKN2B对癌细胞的作用

摘要

目的 探讨不同培养条件（RPMI-1 640、DMEM和DMEM/F12培养液）对人恶性胸膜间皮瘤（malignant pleural mesothelioma,MPM）组织中分离的MPM细胞传代的影响以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(cyclin dependent kinase inhibitor 2B,CDKN2B)对MPM细胞增殖、侵袭和凋亡的作用。方法 从MPM组织中分离细胞分别用RPMI-1 640、DMEM和DMEM/F12培养液培养。CCK-8检测细胞增殖，细胞核及染色体利用瑞氏-吉姆萨染色观察，免疫荧光实验检测MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1荧光强度。RT-qPCR和Western blot分别检测CDKN2B的mRNA和蛋白表达能力。Transwell检测细胞侵袭能力，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 建立的MPM细胞在RPMI-1 640、DMEM和DMEM/F12培养液中传至第10代仍具有较好的活力，且MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1在细胞中均表达，MPM细胞在RPMI-1 640培养液中活力较为稳定。CDKN2B在MPM细胞中低表达（P <0.05），过表达CDKN2B显著抑制MPM细胞的增殖（P <0.05）、侵袭（P <0.05）和上皮间质转化（P <0.01），促进细胞凋亡（P <0.01）。结论 建立的MPM细胞可在RPMI-1 640培养液中稳定传代，CDKN2B可作为MPM诊断和治疗的潜在靶标。

关键词

恶性胸膜间皮瘤 / 培养条件 / RPMI-1640培养液 / CDKN2B / 增殖 / 侵袭