TP53通过MMP1信号通路促进NIH-3T3焦亡并抑制细胞侵袭及迁移

摘要

目的 探究TP53通过MMP1/NLRP3信号通路调控胚胎成纤维细胞焦亡、侵袭、迁移的分子机制。方法 对小鼠胚胎成纤维细胞（NIH-3T3）转染慢病毒，分为空白对照组（Control）、阴性对照组（Vector）、实验组（oeTP53、oeTP53+shNC、oeTP53+shMMP1）。采用CCK-8法检测细胞增殖及活力，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，划痕及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力，采用免疫共沉淀（Co-IP）验证P53与MMP1蛋白相互作用，RTqPCR检测TP53、CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA的mRNA表达水平，Westen bolt检测P53、CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA及焦亡相关蛋白的表达水平；透射电镜观察细胞焦亡小体的变化。结果 与Control及Vector组比较，oeTP53组细胞的增殖活性降低（P <0.01）、细胞凋亡率升高（P <0.000 1）、侵袭（P <0.000 1）及迁移能力（P <0.000 1）降低；CollagenⅠ（P <0.001）、CollagenⅢ（P <0.01）、α-SMA(P <0.01)蛋白表达降低，NLRP3(P <0.05)及cleaved-caspase-1表达升高（P <0.01），且焦亡小体大量出现。对oeTP53组中MMP1的蛋白水平检测发现其升高（P <0.05）,Co-IP表明p53蛋白和MMP1存在相互作用。与oeTP53组比较，oeTP53+shMMP1组中细胞活力升高（P <0.001），细胞凋亡率降低（P <0.01），细胞迁移侵袭能力升高（P <0.01）；瘢痕形成相关蛋白CollagenⅠ（P <0.01）、CollagenⅢ（P <0.001）、α-SMA(P <0.05)蛋白表达升高，细胞焦亡相关蛋白NLRP3(P <0.01)及cleaved-caspase-1(P <0.001)的表达降低，且焦亡小体数量减少。结论 过表达TP53能够抑制小鼠胚胎成纤维细胞生长增殖、迁移、侵袭能力，降低瘢痕形成相关蛋白的表达，促进细胞焦亡，其作用机制可能与MMP1/NLRP3通路有关。

关键词

TP53 / MMP1 / 烧伤后瘢痕 / 瘢痕形成 / 细胞焦亡