基于lncRNA/Hedgehog信号通路表达探讨骨关节炎中自噬对软骨细胞凋亡的影响

摘要

目的 探究骨关节炎中lncRNA/Hedgehog信号通路介导的自噬对软骨细胞功能的影响。方法 在OA软骨细胞（SW1353）建立LPS诱导的软骨细胞炎症模型，并通过胶原Ⅱ免疫荧光染色和甲苯胺蓝染色进行鉴定，分为Normal组、LPS组、LPS/lncRNA HHIP-AS1抑制剂组和LPS/Scr组，RT-qPCR检测lncRNA HHIPas1和HHIP在软骨细胞中的表达，蛋白印迹HHIP、Gli1、Gli2、LC3B-I ab、p62表达，TUNEL染色和流式细胞术（FC）检测细胞凋亡，免疫荧光法（IFA）检测自噬LC3B表达。结果 用LPS处理SW1细胞，与正常软骨细胞相比，LPS诱导后，软骨细胞体积增大，胞浆内空泡增多，细胞核体积增大，部分细胞形态不规则，数量相对减少，甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色减少，LPS刺激会诱导细胞死亡和自噬，lncRNA HHIP-as1和HHIP上调（P <0.05）,Hedgehog信号通路HHIP、Gli1和Gli2的关键分子持续上调（P <0.05）,LPS处理的软骨细胞有明显的凋亡（P <0.05）,LC3B（绿色）积累，LC3B生物合成和加工升高（LC3B Ⅰ和Ⅱ水平升高），p62降解升高（P <0.05）,lncRNA HHIP-AS1抑制剂降低LPS诱导的OA软骨细胞凋亡（细胞凋亡率降低）和自噬（降低了LPS处理的软骨细胞的自噬率，LC3B生物合成和加工减少（LC3B Ⅰ和Ⅱ水平降低），p62降解减弱），差异有统计学意义（P <0.05）。结论 LncRNA HHIP-AS1可能通过调控Hedgehog信号通路抑制LPS诱导的OA软骨细胞凋亡和自噬。

关键词

骨关节炎 / lncRNA HHIP-AS1 / Hedgehog / 自噬 / 软骨细胞