抑制miR-153-3p通过调控Nrf2延缓椎间盘退变的调节机制

摘要

目的 探讨人髓核细胞中miR-153-3p及Nrf2表达与椎间盘退变的相关机制。方法 以H₂O₂构建髓核细胞氧化损伤模型，将miR-153-3p inhibitor-NC、si-Nrf2-NC、miR-153-3p inhibitor、si-Nrf2分组转染至髓核细胞，利用RT-qPCR和Western blot实验检测转染效率，采用CCK-8法检测细胞活力，流式细胞仪检测细胞内活性氧ROS水平、线粒体膜电位下降的比值；RT-qPCR检测Nrf2、MMP-3、Col-Ⅱ、PINK1、Parkin、p62、p38 MAPK的表达量，双荧光素酶报告实验测量荧光素酶活性。结果 （1）经H₂O₂处理的HNPCs细胞活力下降及线粒体膜电位降低、ROS水平提高、Col-Ⅱ表达减少，MMP-3、P62、p38 MAPK表达均升高，PINK1、Parkin表达均降低（P <0.05）,Nrf2无明显变化（P> 0.05）。（2）抑制经H₂O₂处理的髓核细胞miR-153-3p表达，其细胞活力及线粒体膜电位提高、ROS水平下降、Col-Ⅱ表达增加，MMP-3、P62、p38 MAPK表达均降低；而PINK1、Parkin及Nrf2表达均升高（P <0.05）。（3）抑制经H₂O₂处理的髓核细胞miR-153-3p表达，同时沉默Nrf2表达，可见细胞活力及线粒体膜电位下降、ROS水平升高、Col-Ⅱ表达减少，且其MMP-3、P62、p38MAPK表达升高；Nrf2、PINK1、Parkin表达降低（P <0.05）。（4）双荧光素酶活性分析显示miR-153-3p与Nrf2间存在结合位点和结合关系，关系呈负相关（P <0.05）。结论 抑制miR-153-3p表达可缓解H₂O₂诱导的髓核细胞退变和纤维化，激活受损髓核细胞自噬、延缓髓核细胞凋亡，这一作用与Nrf2调控PINK1/Parkin途径、p38 MAPK炎性反应通路相关。

关键词

椎间盘退变 / 人髓核细胞 / miR-153-3p / Nrf2