环指蛋白41调控胆管癌细胞增殖和转移的生物学作用

摘要

目的 探讨环指蛋白41(ring finger protein 41,RNF41)在胆管癌发生和发展过程中的作用。方法 通过生物信息学、Western blot和免疫组织化学分析2010年1月至2016年12月期间在昆明医科大学第二附属医院和昆明市甘美医院接受全手术切除的84例胆管癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织中RNF41的mRNA和蛋白质的表达；利用TIMER 2.0数据库中临床资料分析RNF41对胆管癌患者预后生存的影响，分析RNF41与肿瘤临床特点的关系；RNF41 siRNA经转染HCC9810、RBE、HUCCT1细胞后，利用CCK-8、Edu、克隆形成实验和Western blot实验，分析敲低RNF41组和对照组胆管癌细胞的增殖作用的变化；利用Transwell实验和EMT标记物及迁移标记物检测分析敲低RNF41组和对照组胆管癌细胞的侵袭作用的变化，Western blot实验检测敲低RNF41对胆管癌细胞上皮间质的转化作用；12只BALB/c小鼠，随机分为两组，对照组和敲低RNF41组，每组各6只，进行裸鼠成瘤实验、Western blot实验和免疫组织化学染色分析敲低RNF41对动物体内肿瘤生长的影响。结果 实时定量荧光PCR分析显示胆管癌肿瘤组织中RNF41 mRNA表达水平明显高于相应的癌旁组织（P<0.01），免疫组织化学染色评价RNF41的蛋白表达水平结果与其一致。TIMER 2.0数据库分析RNF41与胆管癌的分级，分期、淋巴结转移及生存期的关系，结果显示RNF41的表达与CHOL组织学分级和肿瘤淋巴结转移阶段密切相关（P<0.01）；生存分析显示RNF41的高表达又与CHOL患者的不良预后密切相关。CCK-8、EdU、克隆形成实验显示在胆管癌细胞中与对照组组相比，敲低RNF41组抑制肿瘤细胞的增殖能力；Westernblot结果显示与对照组相比干扰RNF41组肿瘤细胞EMT标志物E-cadherin的水平显著提高，Ncadherin和MMP9的水平降低（P<0.05）。然而，通过在裸鼠体内进行异体肿瘤移植实验和检测EMT标志蛋白发现，与体外细胞实验分析一致的EMT相关蛋白检测结果（P<0.01）；此外与对照组相比RNF41敲低组抑制了裸鼠体内胆管癌细胞皮下成瘤的能力（P<0.05）。结论 RNF41可促进胆管癌的发生和发展，并与临床病理特征及患者的不良预后密切相关，敲低RNF41对胆管癌细胞的增殖、侵袭、EMT和肿瘤形成都有抑制作用。

关键词

胆管癌 / 环指蛋白41 / 增殖 / 侵袭

基金资助

国家自然科学基金(82360447); 云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项基金(202201AY070001-158;202301AY070001-113;202301AY070001-128;202501AY070001-106)