外泌体miR-210-3p通过靶向FBXO31促进宫颈癌的化疗耐药和干细胞特性

摘要

目的 探讨外泌体中的microRNA(miRNA)miR-210-3p在宫颈癌（cervical cancer,CC）化疗耐药及干细胞特性形成中的作用，并揭示其靶向F-盒蛋白31(F-box protein 31,FBXO31)蛋白的潜在机制。方法 以顺铂敏感Hela细胞和顺铂耐药HeLa/DDP细胞为对象，通过超速离心法提取HeLa外泌体，并通过PKH26红色荧光探针验证HeLa/DDP细胞对外泌体的摄取。将NC inhibitor、miR-210-3p inhibitor单独或联合si-NC、siFBXO31转入HeLa细胞。转染24 h后，提取外泌体，并与HeLa/DDP细胞共培养48 h。然后将HeLa/DDP细胞分为五组：Ctrl组（PBS空白对照）、NC inhibitor组、miR-210-3p inhibitor组、miR-210-3p inhibitor+si-NC组和miR-210-3p inhibitor+si-FBXO31组。RT-qPCR检测miR-210-3p和FBXO31表达水平；采用MTT法检测IC50；瘤球形成实验检测干细胞特性；Western Blot检测FBXO31和干细胞标志物的表达水平；双荧光素酶检测miR-210-3p与FBXO31靶向关系；裸鼠移植瘤检测外泌体miR-210-3p对宫颈癌体内转移的影响。结果 与人正常宫颈上皮细胞HCeEpiC相比，miR-210-3p在宫颈癌细胞系HeLa、HT3、C33A和Caski显著高表达（P<0.05），而FBXO31显著低表达（P<0.05）。与HeLa细胞相比，HeLa/DDP细胞IC50和miR-210-3p的表达水平显著增加（P<0.05），且HeLa的外泌体可被HeLa/DDP细胞摄取。与NC inhibitor组相比，miR-210-3p inhibitor组的miR-210-3p、Oct-4、SOX2和NANOG表达水平、IC50显著降低（P<0.05），而FBXO31表达显著增加（P<0.05）。与miR-210-3p inhibitor+si-NC组相比，miR-210-3p inhibitor+si-FBXO31组的FBXO31表达显著降低（P<0.05）,IC50、Oct-4、SOX2和NANOG表达水平显著增加（P<0.05）。与对照组和空载组相比，miR-210-3p干扰组的肿瘤重量和肿瘤体积显著降低（P<0.05）。结论 外泌体miR-210-3p通过靶向抑制FBXO3，从而促进CC细胞的对化疗药物DDP耐药性和干细胞特性。

关键词

外泌体 / miR-210-3p / 化疗耐药 / 干细胞特性 / FBXO31 / 宫颈癌

基金资助

四川省卫生健康科研基金(23PJ249)