HIF-1α/Snail通路影响非那雄胺抑制膀胱癌细胞上皮间充质转化的分子机制研究

摘要

目的 探讨非那雄胺对膀胱尿路上皮癌中上皮间充质转化的影响及其机制。方法 采用不同浓度的非那雄胺（0.1%、0.5%、1%）处理人膀胱癌T24细胞24 h，设置未处理的T24细胞为对照组。部分细胞于1%O2条件下进行缺氧处理以模拟低氧微环境。通过免疫荧光检测细胞增殖标志物Ki-67,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡率，划痕实验评估细胞迁移能力，Western blot检测HIF-1α、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin等EMT相关蛋白的表达。为进一步验证HIF-1α通路在非那雄胺抗肿瘤作用中的作用，构建HIF-1α过表达慢病毒载体（MOP-1）并转染T24细胞。动物实验中，构建T24荷瘤裸鼠模型，将小鼠随机分为对照组、MOP-1组、1%非那雄胺组和1%非那雄胺+MOP-1组，每组4只。连续灌胃给药4周后，观察肿瘤生长、转移及肝周淋巴结变化，并进行H&E染色与组织学分析。结果 非那雄胺以浓度依赖的方式影响T24细胞的增殖、凋亡以及上皮向间充质转化。和对照组相比，非那雄胺处理的T24细胞处于生长期的数目降低，迁移的数量降低，上皮标志物表达提高，间质标志物表达降低（P<0.05）。暴露在缺氧条件下的T24细胞中HIF-1α通路标志物的表达显著增加（P<0.05），而1%非那雄胺处理的T24细胞中检测到HIF-1α通路被抑制（P<0.05）。1%非那雄胺HIF-1α过表达质粒共处理组的HIF-1α通路表达水平低于对照组（P<0.05），且小鼠肿瘤质量与体重之比较低，膀胱癌向肝转移数量降低（P<0.05）。结论 非那雄胺通过抑制HIF-1α/Snail表达可以有效地阻断膀胱癌生长以及上皮细胞向间充质细胞转化。

关键词

非那雄胺 / 膀胱癌 / HIF-1α/Snail / 上皮-间质转化